Voici une description complète des facteurs clés influençant la précision de l'analyseur de cellules de corps de lait, couvrant plusieurs dimensions, de la manipulation des échantillons à la performance de l'instrument:
I. collecte d'échantillons et pré - traitement
Représentativité de l'échantillonnage
Le principe d'échantillonnage stratifié doit être strictement suivi, en particulier pour les grands réservoirs de stockage de lait ou les véhicules de transport, le mélange d'échantillons doit être prélevé séparément dans les trois couches supérieure, moyenne et inférieure, afin d'éviter une distribution inégale des cellules somatiques en raison de la séparation des couches graisseuses. Une quantité insuffisante (< 50 ml) d'un seul échantillon amplifie l'erreur aléatoire et il est recommandé de prélever un échantillon composite d'au moins 100 ml selon la norme ISO.
Conditions de conservation et de transport
Les échantillons doivent être réfrigérés à 4 ° C et testés dans les 6 heures, le stockage tardif provoque la rupture de l'autolyse des cellules somatiques, libérant des fragments d'ADN qui interfèrent avec le comptage. Un agent de conservation inoffensif (p. ex., azide de sodium) doit être ajouté lors du transport sur de longues distances et éviter les chocs violents.
Traitement d'homogénéisation
Les échantillons de lait insuffisamment homogénéisés sont sujets à l'accumulation de globules graisseux, obstruant le champ de vision du microscope ou bloquant les bassins d'écoulement. Les particules doivent être dispersées avec un traitement par ultrasons normalisé (20 kHz, 30 secondes) Tout en contrôlant la température < 40 ° C pour prévenir la dénaturation des protéines.
II. Indicateurs de performance de base des instruments
Précision du système optique
La cytométrie en flux s'appuie sur l'intensité lumineuse diffusée par laser pour différencier les types de cellules, la stabilité en longueur d'onde du laser (± 0,5 nm) et la sensibilité du photomultiplicateur déterminent directement le rapport signal sur bruit. L'allumage quotidien doit effectuer le contrôle de l'espace vide du liquide de gaine, éliminer les interférences de bruit de fond.
Rationalité de la fixation des seuils
Le paramètre double de diffusion frontale (FSC) et latérale (SSC) doit éviter la zone de signalisation des impuretés. Par exemple, la délimitation des communautés de cellules somatiques actives dans une plage d'angles de diffusion spécifiques exclut l'excrétion des cellules épithéliales et la contamination microbienne.
Contrôle hydrodynamique
La force de cisaillement excessive du bassin d'écoulement entraîne la fragmentation des cellules fragiles, le débit doit être contrôlé à 5 - 10 μl / s; Lorsque la pression de la gaine fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique fluidique
Iii. Gestion des réactifs et des consommables
Qualité du colorant
Le bleu Trypan et d'autres colorants vivants doivent maintenant être utilisés et conservés à l'abri de la lumière. Les colorants défaillants colorent anormalement les cellules mortes, provoquant un nombre de faux positifs. Chaque lot de réactifs nouvellement formulés doit être étalonné pour l'efficacité de la coloration (> 95%) avec une suspension cellulaire standard.
Résidus de liquide de nettoyage
Le liquide de nettoyage résiduel de la paroi interne de l'aiguille d'admission (p. ex., hypochlorite de sodium) peut cliver la membrane des globules blancs, ce qui entraîne une omission. Il est nécessaire de rincer la ligne 3 fois avec de l'eau désionisée avant et après chaque détection et de remplacer le liquide résiduel par de l'air.
Comptez la pureté de la piscine
Les dépôts de protéines de fixation de la paroi interne des microcapillaires Adsorbent les cellules et doivent être nettoyés par immersion hebdomadaire avec un lysat enzymatique (trypsine + EDTA), désactivant les rayures pour ne pas créer de cellules de capture de rayures.
Iv. Facteurs environnementaux et humains
Contrôle de la température et de l'humidité
Un écart de température de laboratoire de 25 ℃ ± 2 ℃ peut entraîner des changements dans la vitesse de réaction du réactif, et les composants électroniques sont susceptibles de court - circuit lorsque l'humidité > 70% HR. Le système thermostatique et humide doit être équipé d'un module de déshumidification indépendant.
Différences dans les compétences des opérateurs
L'application manuelle de lames d'épaisseur inégale (épaisseur idéale de 10 à 20 μm) entraîne un effet d'accumulation locale, et un applicateur automatique peut éliminer cette erreur. La formation doit inclure une évaluation de la reconnaissance de la forme cellulaire.
Fréquence de vérification des contrôles de qualité
Le taux de récupération a été testé quotidiennement à l'aide d'une concentration connue de poudre de lait standard (contenant 500 000 cellules somatiques / ML), nécessitant que les valeurs mesurées tombent dans l'intervalle de ± 10% indiqué. La courbe d'étalonnage doit être rétablie après la maintenance mensuelle.