L'achat de colonnes de chromatographie ACE doit être orienté vers l'objectif de séparation, combinant les caractéristiques de la phase stationnaire, les paramètres physiques et les contraintes du système. Il est recommandé d'évaluer en priorité la nature de l'échantillon par rapport à la cible de séparation, de réajuster la phase stationnaire correspondante et de valider expérimentalement le Protocole d'optimisation.

Voici un exposé sur les exigences d'achat optionnel pour les colonnes de chromatographie ACE:

Objectif d'application clair et caractéristiques de l'échantillon

Propriétés de l'Analyte

Polarité et solubilité: pour conserver les composés fortement polaires (Polypeptides, sucres par example), on préfère la phase stationnaire à blocs hydrophiles; Pour les échantillons hydrophobes (p. ex. vitamines liposolubles), une colonne C18 - HL à haute charge en carbone est appropriée.

Acido - basicité et stabilité: les composés basiques sont sujets à des effets secondaires avec les groupes hydroxyles de silicium, ce qui entraîne une traînée de crête. La phase stationnaire ultra - inerte (par exemple, la série C18) doit être choisie, qui réduit les résidus d'hydroxyle de silicium par un traitement d'inactivation alcaline, améliorant l'effet de séparation.

Besoins en mode de séparation

Chromatographie en phase inverse: on choisit classiquement une colonne C18 ou C8; Pour augmenter la sélectivité en composés aromatiques, on peut choisir une colonne phényle.

Flexibilité dans le développement de la méthode: pour les mélanges complexes (par exemple les isomères), les colonnes C18 - AR ou C18 - PFP fusionnent les deux avantages de la phase de liaison, offrant une sélectivité différenciée.

II. Sélection des paramètres physiques de base

Taille des particules et effet colonne

≤ 3 μm taille des particules: convient pour uhplc, l'effet de colonne est le plus élevé, mais la contre - pression est considérablement augmentée.

Taille des particules de 5 μm: en tenant compte de l'effet de la colonne et de la compatibilité du système, il s'agit d'un choix commun pour HPLC.

Taille des particules ≥ 10 μm: pour un criblage rapide ou une séparation de grade préparatoire.

Conception de taille de colonne

Longueur: 150mM pour l'équilibre conventionnel, 250mm pour les échantillons complexes, colonne courte pour la séparation à grande vitesse.

Diamètre intérieur: 4,6 mm pour l'analyse standard, 2,1 mm pour la microanalyse et plus de 10 mm pour la préparation.

Adaptation des pores

100 Å: convient aux petites molécules (poids moléculaire < 1000 DA).

300 Å: les grandes pores soutiennent la séparation des macromolécules biologiques telles que les protéines, les Polypeptides et autres.

Compatibilité du système et considérations opérationnelles

Adaptation de l'équipement

Système uhplc: doit choisir une colonne de remplissage inférieure à 2 μm, résistant à la haute pression.

HPLC préparative: Choisissez une colonne de grand diamètre intérieur pour réduire le risque de colmatage.

Limitation de la phase d'écoulement

Condition de phase aqueuse élevée: la colonne C18 - aq utilise la technique d'incrustation polaire pour inhiber l'action hydrophile et maintenir une rétention stable.

PH: Évitez les colonnes traditionnelles à matrice de silice, avec le choix entre des particules hybrides ou des colonnes de polymères.