La détection par filtration microbienne est le processus d'enrichissement des micro - organismes d'un échantillon par des méthodes physiques ou chimiques qui permettent d'isoler et d'identifier les souches cibles. Cette méthode est largement utilisée dans les domaines de la détection de la qualité de l'eau, de l'inspection de la stérilité des médicaments, de l'analyse de la contamination microbienne des aliments, etc. Les sujets de détection courants comprennent les bactéries (E. coli, Staphylococcus aureus), les champignons (moisissures, levures, etc.). Une séparation et une qualification précises sont essentielles pour garantir la fiabilité des résultats des tests.
Méthodes de filtration et de séparation microbiennes
2.1 traitement et filtration avant échantillon
La filtration microbienne est généralement réalisée par membrane filtration (MF) pour les échantillons liquides (eau, boissons, etc.). Les étapes sont les suivantes:
1. Préparation de l'échantillon: homogénéiser l'échantillon liquide ou solide (si la nourriture doit être homogénéisée pour diluer).
2. Filtration: piégeage des microorganismes à travers une membrane filtrante de 0,22 à 0,45 μm de diamètre de pore.
3. Transfert: la membrane filtrante est attachée à un milieu sélectif ou non sélectif pour la culture.
2.2 techniques de séparation sélective
Différents micro - organismes nécessitent des milieux et des conditions de culture spécifiques:
- bactéries:
- Escherichia coli: utilisez de l'EMB (agar erythromy Blue) ou de l'agar McConkey (macconkeyagar).
- Staphylococcus aureus: utiliser de la gélose Mannitol à haute teneur en sel (MSA).
- le champignon:
- moisissures et levures: avec de la gélose au glucose salé (SDA), l'ajout d'antibiotiques inhibe la croissance bactérienne.
Techniques d'identification microbiologique
3.1 identification morphologique
- caractérisation des colonies: observation de la morphologie des colonies (taille, couleur, bords, texture de surface).
- si Staphylococcus aureus est jaune doré, lisse et convexe; Les colonies de moisissures sont tomenteuses.
- observations microscopiques: coloration de Gerland (différenciant les bactéries g⁺ / g⁻), coloration de Bacillus, etc.
3.2 essais biochimiques
Identification des souches par propriétés métaboliques:
- test oxydase: distinction entre Pseudomonas (positif) et enterobacterium (négatif).
- test imvic: identification d'Escherichia coli (mode de résultat + + -).
- test de fermentation du sucre: par exemple, la capacité de fermentation du lactose différencie Escherichia coli de Salmonella.
3.3 méthodes de biologie moléculaire
- séquençage 16SrRNA: l '« étalon - or » de l'identification bactérienne, qui peut être précis au niveau du genre ou de l'espèce.
- technique PCR: détection de l'amplification contre des gènes spécifiques tels que le gène uida d'Escherichia coli.
- MALDI - TOFMS: identification rapide des micro - organismes par empreinte protéique.
Applications et défis
4.1 application pratique
- surveillance de la qualité de l'eau: détection de coliformes totaux et de bactéries pathogènes (p. ex. Legionella) dans l'eau.
- inspection de la stérilité des médicaments: Assurez - vous que les injections, les produits biologiques sont exempts de contamination microbienne.
- sécurité alimentaire: détection des salmonelles, Listeria, etc. dans les aliments.
4.2 défis technologiques
1. Détection microbienne à faible abondance: culture d'enrichissement requise lorsque la teneur en bactéries cibles dans l'échantillon est faible.
2. Interférence hétérobactérienne: les échantillons complexes (par exemple, selles, sol) doivent être optimisés pour le milieu sélectif.
Besoins d'identification rapide: les méthodes traditionnelles prennent du temps et doivent promouvoir les techniques de biologie moléculaire.