I. Avant l'échantillonnage: clarifier les besoins et préparer la base

La planification préalable à l'échantillonnage est une condition préalable à l'assurance de l'effet, et un programme ciblé doit être élaboré en conjonction avec les objectifs de détection (p. ex. surveillance de l'environnement, évaluation de l'effet de la désinfection, analyse scientifique, etc.).

1. Choix raisonnable du type d'échantillonneur

Les échantillonneurs de différents principes sont adaptés à différents scénarios et caractéristiques microbiologiques, le choix du type correspondant est la base:

Échantillonneurs à impact (par exemple, Anderson cascade impact Sampler, Crack impact Sampler): impact de micro - organismes sur un milieu de culture ou une membrane de piégeage par un flux d'air à grande vitesse, adapté à la détection de bactéries vivantes à cultiver (par exemple, détermination du nombre total de colonies) et particulièrement adapté à la capture de micro - organismes de différentes tailles de particules (impact en cascade permet de distinguer la distribution de la taille des aérosols).

Échantillonneurs à filtre (par exemple, échantillonneurs à membrane filtrante): utilisation de membranes filtrantes (par exemple, membranes de polycarbonate, membranes mixtes de cellulose) pour piéger les micro - organismes, convenant à des détections de haute sensibilité (par exemple, quantification par QPCR, détection de virus) ou nécessitant l'analyse simultanée de scénarios dans lesquels les micro - organismes sont associés à des particules, sous réserve de l'influence du matériau de la membrane filtrante sur l'activité microbienne (par exemple, sélection de MEMBRAN

Échantillonneurs à décantation (p. ex., méthode de décantation en boîte plate): facile à utiliser mais peu efficace, ne convient qu'à un dépistage microbiologique environnemental sommaire (p. ex., surveillance quotidienne en salle blanche) et n'est pas recommandé pour l'échantillonnage microbiologique à faible concentration ou à petite taille de particules.

Échantillonneur centrifuge: séparation des micro - organismes par la force centrifuge, adapté à l'échantillonnage de scènes d'écoulement (par exemple, atelier, lieux publics), l'avantage est la petite taille et la portabilité, mais l'efficacité de capture est fortement influencée par la stabilité du flux d'air.

2. Optimisation de la sélection du milieu de capture

Le milieu de capture (milieu de culture, membrane filtrante, liquide absorbant) détermine directement l'efficacité de capture et la viabilité du micro - organisme:

Sélection du milieu de culture: sélection de milieux spécialisés en fonction des caractéristiques microbiologiques cibles (par exemple gélose nutritionnelle pour la détection des bactéries, gélose au glucose de pomme de terre PDA pour les champignons, milieu sélectif pour les bactéries pathogènes); Assurez - vous que le milieu de culture est frais (réfrigéré à 4 ° C pendant pas plus de 7 jours après la préparation), d'épaisseur uniforme (environ 3 - 5 mm) et d'éviter la fissuration sèche ou la contamination.

Sélection de la membrane filtrante: la préférence est donnée aux Membranes filtrantes à faible adsorption et à porosité élevée (telles que les membranes PTFE en polytétrafluoroéthylène, les membranes en nitrate de cellulose) qui réduisent les pertes microbiennes dues à l'électricité statique ou à l'adsorption; La taille des pores de la membrane filtrante doit être adaptée à la taille des microorganismes (0,22 μm ou 0,45 μm sont généralement choisis, et la membrane filtrante de 0,1 μm peut être choisie pour l'échantillonnage viral).

Sélection du liquide absorbant: lorsqu'il est utilisé dans un échantillonneur à absorption liquide, le liquide absorbant doit tenir compte de l '« efficacité de capture » et de la « rétention de l'activité microbienne » (p. ex. avec une solution saline physiologique ou un tampon contenant 0,05% à 0,1% de Tween 80 pour réduire la sédimentation microbienne et l'adsorption; l'échantillonnage viral peut être complété par de l'albumine sérique bovine BSA pour protéger la structure virale).

3. Évitez la contamination avant l'échantillonnage

L'échantillonnage microbiologique est sensible à la contamination extérieure et nécessite un contrôle strict de l '« environnement stérile» avant l'échantillonnage:

Les échantillonneurs (par exemple, têtes de pulvérisation pour échantillonneurs à percussion, pinces à membrane filtrante, tubes de prélèvement) doivent être stérilisés à l'avance (autoclave à la vapeur à 121 ° C / 20 min, ou à la chaleur sèche à 160 ° C / 2 h; les pièces en plastique peuvent être stérilisées par UV Pendant 30 min après un essuyage à 75% d'alcool).

Le milieu de culture, les membranes filtrantes et autres supports de capture doivent être chargés dans des conditions aseptiques (par exemple, fonctionnement à l'intérieur d'une table ultra - propre), en évitant le contact avec les mains ou la contamination par l'exposition à l'air.

Effectuer un « pré - équilibrage » de la zone d’échantillonnage avant l’échantillonnage (p. ex. fermer les portes et les fenêtres pendant 30 min avant d’échantillonner dans une salle blanche pour éviter que le flux d’air ne soit perturbé par les déplacements du personnel).

II. Échantillonnage: paramètres optimisés et spécifications de fonctionnement

Le contrôle des paramètres et les détails opérationnels lors de l'échantillonnage sont au cœur de l'amélioration de l'efficacité de capture, qui doit être ajustée dynamiquement en fonction du principe de l'échantillonneur et des conditions environnementales.

Optimisation des paramètres d'échantillonnage de base

En fonction du type d'échantillonneur et des besoins de détection, Ajustez les paramètres clés pour maximiser l'efficacité de capture:

Débit d'échantillonnage: le débit doit correspondre à la conception de l'échantillonneur (par exemple, le débit recommandé de 28,3 L / min pour l'échantillonneur Anderson, 10 - 30 L / min pour l'échantillonneur de fissure). Un débit trop faible entraîne une capture insuffisante des micro - organismes de petite taille (< 5 µm); Un débit trop élevé peut entraîner l'inactivation des micro - organismes ou des éclaboussures de milieu de culture en raison de l'impact du flux d'air. Il est recommandé d'étalonner le débit (erreur contrôlée à ± 5%) avant l'échantillonnage au moyen d'un « calibrateur de débit».

Temps d'échantillonnage: il est nécessaire d'équilibrer "capture" avec "activité microbienne". L'échantillonnage de courte durée (5 - 15 min) convient aux environnements à forte concentration (p. ex. ateliers contaminés) et évite l'humidité excessive du milieu de culture ou l'accumulation excessive de micro - organismes; L'échantillonnage de longue durée (30 - 60 min) convient aux environnements à faible concentration (p. ex., salles blanches, salles d'opération), mais il convient de noter que le temps d'échantillonnage de l'échantillonneur à percussion ne doit pas dépasser 60 min (pour éviter le séchage du milieu), et que l'échantillonneur à filtre doit empêcher le colmatage de la membrane filtrante (les grosses particules peuvent être éliminées par préfiltration).

Hauteur et position d'échantillonnage: déterminer le point d'échantillonnage en fonction du but de la détection:

Surveillance de l'environnement: hauteur d'échantillonnage de 1,2 à 1,5 m (au niveau de la ceinture respiratoire humaine) avec 3 à 5 points d'échantillonnage par zone (répartis uniformément, en évitant les coins des murs, les évents, directement au - dessus des sources de contamination).

Évaluation de l'efficacité de la désinfection: les échantillons doivent être prélevés au même endroit avant et après la désinfection, afin d'assurer la cohérence du contraste.

Traçabilité des aérosols: des points de prélèvement peuvent être installés à différentes hauteurs (p. ex. 0,5 m, 1,5 m, 3 m) pour analyser la distribution verticale des micro - organismes.

Contrôle de la stabilité du flux d'air: Évitez que l'échantillonneur soit directement en face de l'évent, du ventilateur ou de la direction de déplacement du personnel lors de l'échantillonnage; Éteignez l'équipement de ventilation locale si nécessaire ou utilisez un pare - Vent pour fixer l'échantillonneur, réduisant ainsi les écarts d'échantillonnage causés par les perturbations du flux d'air.