Présentation

Nécessaire pour de multiples applications biologiques pour surveiller le nombre de cellules, la reproduction, la santé, la fusion et la CytotoxicitéRienMarquage des cellulesdétection. Ces applicationsbesoinUtilisez une lumière transmise efficace et fiable(TL)Fonction d'imagerie et d'analyse, cette fonction fournit une segmentation précise pour quantifier les cellules et évaluer diverses réponses cellulaires et morphologies. De plus, la combinaison de l'imagerie par transmission de lumière à contraste élevé et de l'imagerie par Marquage fluorescent pour de nombreuses détections cellulairesAnalyseTrès important.

MetaXpress 6.5Personnaliser l'éditeur de modulesTLL'algorithme de division cellulaire est un type d'imagerie des cellules utilisant la lumière transmiseEtAlgorithme analytique quantitativement optimisé et fiable. Cette note d'application montreTLUtilité et précision de la segmentation cellulaire- Oui.Analyse et quantification par comparaison du nombre total de cellules en lumière transmise avec le nombre de cellules colorées en fluorescenceCHOetHeLaAlgorithme des cellules (fig. 1) et- Oui.

La méthode

MettreCHOetHeLaDilution cellulaire inoculée en noir, fondtransparent96Dans la plaque de trou, rangée du Haut de la plaqueCommencer le panneau de tissu (dans la rangée supérieureChaque trou20，000Une cellule) et. appuyez sur chaque cellule1Pour:2La proportion dansProcéder vers le bas dans la microplaqueDilution，6Un trou reconstitué- Oui.Culture cellulaire24heureaprès, dans37°CEt,5 % de CO2 Utilisation en incubateurHoechst 33342Les cellulesColorant nucléaire colorant les cellules30Minutes. Puis utiliser4%Paraformaldéhyde fixe les cellules et utiliseDPBSLaver deux fois. ParImageXpressMicro®Systèmes d'imagerie à haute connotation etMetaXpressLe logiciel image les cellules. utiliser10x Plan FluorObjectif Imager un champ de vision, l'objectif capture avec précision jusqu'à1500Une cellule. Utilisation de la lumière transmise etFluorescence bleueLe canal Fluorescent prend des images avec des temps d'exposition respectifs de15 mset35 ms- Oui.

Avantages

utiliser
Paire d'imagerie de lumière transmiseObjets ciblesEffectuer une surveillance de segmentation et de comptageSous lumière transmiseProlifération cellulaire

Utilisation de plusieurs méthodes d'analyseÉvaluationTLEffets de l'algorithme de division cellulaire

Comprendre de nombreux types et tailles de cellulesOutils de quantification
Outils quantitatifs et analytiques

Figure 1Pour:Réglage pour l'analyse sous lumière transmiseFilmerdeHeLaetCHOLes cellulesImagesModules personnalisés. FaireutiliserHoechst 33342Les cellulesLes colorants nucléaires colorent les cellules. utiliserFluorescence bleueLes canaux etLumière transmise(TL)effectuerImagerie cellulaire,ParamétragePersonnalisez le module pour analyser et quantifier les cellules en fonction de l'imagerie par lumière transmise et de l'imagerie par fluorescence nucléaire.

Dans l'éditeur de modules personnalisésParamétrageTLAlgorithme de division cellulaire

La segmentation cellulaire précise est importante pour quantifier les cellules capturées par transmission de lumière.pourTLLes cellulesDivisionCellules sélectionnéesAlgorithmeUnpouvoirSegmentation préciseetIdentificationHeLaetCHOLes cellules （Figure 2). D'autres paramètres sont disponibles. Les cellulesAlgorithmeC. BOu les cellulesAlgorithmeCPeutSéparémentPour l'analyse de petites ou grandes cellules- Oui.Dans l'analyseDans le moduleFaire des réglages peutPour filtrer la surface totaleMoins quede 150 pM2Les cellules (fig. 3). CeciUn réglagePeutAvecAssurez - vous d'éviter les petites cellules mortes qui vont se regrouperFaites commeLes cellules vivantes sont comptées et analysées.En outre,Cellules définiesAlgorithme de comptage nucléaire peutAvecPrécisQuantitativeHeLaetCHOdeNoyau cellulaire (fig. 4).

CombinéComptage des cellules en lumière transmise vs comptage des noyaux fluorescents

utiliserTLAlgorithme de division cellulaireParamétrageModules personnalisés pour une segmentation préciseHeLaetCHOLes cellules (fig. 6) et- Oui.Aucune différence statistique entre le nombre total de cellules et le nombre de noyaux dans la lumière transmise,MontrerTLPrécision de l'algorithme de segmentation cellulaire (fig. 7). En plus du comptage cellulaire,TLL'algorithme de division cellulaire génère également plusieursDonnéesPour évaluer la réponse cellulaire etLes cellulesLes différentes caractéristiques de la morphologie (fig. 5). Par exemple, les cellules peuvent être générées et intracellulairesObjets ciblesComptage total et moyen, surface, intensité, forme, hauteur、Largeur ainsi que diversautreDifférentes lectures. utiliserOptions de filtreL'élimination des cellules mortes enveloppées peut aller plus loinOptimisationCeProcessus, et réduirepeuLa nécessité d'utiliser des cellules vivantes ou des cellules entières pour la coloration. En outre, coloration et comptage des noyaux cellulairesLes cellulesVérifierL'éléphantL'utilisation d'algorithmes montre l'imagerie de la lumière transmise par analyse- Oui.

Figure 2. MettreTLAlgorithme de division cellulaire appliqué à une sélectionHeLaImage de la lumière transmise par les cellules.Dans l'éditeur de modules personnalisés, vous pouvezAvecParParamétrageChoisir la longueur d'onde de la source et représenter le type de cellule paireTLL'algorithme de division cellulaire est configuré. Les cellulesAlgorithmeUnPeutAvecEfficacementIdentifier dans l'imagedeHeLaetCHOLes cellules.

Figure3. TLSuperposition de division cellulaire etFiltre paramètres après filtrageImages comparatives superposées. La zone minimale seraConfiguré pour150 μm2AvecFiltré死Les cellules- Oui.

Figure 4. utiliserVérification des cellulesL'éléphantDivisionPaire de modulesImage fluorescente du noyau cellulaireeffectuerCompter.Vérifier les cellules selon les cellules pour la quantification,FaireutiliserHoechst 33342Au noyau cellulaireeffectuerTeinture. Optimisation de l'évaluation et de la force de largeur minimale et maximale au - delà des paramètres de fond locaux pour une précisionIdentificationtousFineNoyau cellulaire.FineNoyau en bleu (image de gauche), analyseOmbrageJaune (image de droite).

Figure5. HéLaUne image représentative des cellules,ParamétrageModule personnalisé analyse d'imageLa méthode- Oui. bleuOmbrageReprésentant adoptéTLUtilisation de l'algorithme de division cellulaireTLFiltresOmbragéFiltre blindéCellules trouvées, jaune pour vérifier par comptageL'éléphantNoyau trouvé par l'algorithme. Les déterminations requises pour le module personnalisé peuvent être effectuées dans l'onglet déterminationParamétrage- Oui.NécessaireL'objet à déterminer estDéfinitionpourpouvoirParTLDivision cellulaireAlgorithmeObjets masqués, sélectionnez count checkupL'éléphantOmbragéBlindageDétermination de chaqueObjets ciblesCaractéristiques.

Figure6. HéLaetCHOUne image de la cellule, etApplicationTLModule personnalisé de segmentation cellulaireAprès optimisationAnalyse des imagesrésultat- Oui.Fluorescence bleueLe noyau est affiché en bleu(gauche)，Dans l'imageAnalyseAu milieuMasquePour jaune(à droite)Les cellules dans la lumière transmise àMasque bleu clair. par10x Plan FluorL'objectif est enImageXpressmicroCapturez des images sur le système et utilisez le nouveauTLUn module personnalisé de configuration de l'algorithme de segmentation cellulaire analyse les images.

Figure 7. Basé surTLDivision cellulaire et nucléomètreNombre d'objetsComparaison des modulesHeLaetCHONombre total de cellules de la cellule. Presse1Pour:2Proportion de cellules diluées de chaque puits20，000La concentration des cellules commence.

conclusion

MetaXpressPersonnaliser l'éditeur de modulesTLAlgorithme de division cellulaire peutAvecQuantifier et analyser efficacement de nombreux types et tailles de cellules.ImageXpress®Micro confocaleFonction de segmentation optimisée supportée par le système d'analyse d'imagerie à haute connotation de confocation de Carrousel analyse indépendante du FluorophoreLes cellulesMorphologie. Quantification des cellules à l'aide d'images de lumière transmisepouvoirRendre la capacité de détection des chercheurs plus flexible. CeDescription de l'applicationLa méthode décrite montreTLLes algorithmes de segmentation cellulaire peuvent être utilisés pour une variété de tests, y compris, mais sans s'y limiter, la prolifération, les études de Cytotoxicité et la transfection.