La colonne de chromatographie liquide est le composant de séparation principal du chromatographe liquide à haute performance (HPLC), dont les performances affectent directement la précision et la répétabilité des résultats analytiques. Les colonnes de chromatographie doivent être remplacées à temps en cas d'anomalies de pics, d'augmentation de la pression de la colonne, de diminution du nombre de plateaux théoriques ou de perte de phase stationnaire. Voici le processus de remplacement et les principales considérations:
I. préparation préalable
Protection de sécurité
Portez des gants de protection, des lunettes et des vêtements de laboratoire pour éviter tout contact avec des solvants organiques et des composants tranchants.
Éteignez l'appareil et relâchez la pression du système pour éviter les éclaboussures de fluide à haute pression.
Outils et matériaux
Nouvelle colonne de chromatographie (modèle / taille conforme à la colonne d'origine), connecteur 2 voies, clé, joint d'étanchéité (matériau PEEK préféré).
Raccords de tuyauterie de rechange (pour ajuster la longueur).
Consultez les instructions de l'instrument et le tableau des paramètres techniques de la colonne de chromatographie.
Confirmation de l'état du système
Arrêter la procédure en cours d'exécution, passer à une phase mobile pure (par exemple, méthanol / acétonitrile), rincer continuellement à faible débit (0,5 - 1 ml / min) pendant au moins 30 minutes pour éliminer les échantillons résiduels à l'intérieur du tube.
Débranchez la ligne de signal du détecteur et marquez l'emplacement de l'interface de la ligne entrante et sortante.
II. L'étape de démontage de l'ancienne colonne
Module colonne chromatographique de positionnement
Recherchez le support de colonne chromatographique à l'intérieur de la boîte de température de la colonne et observez l'ordre de connexion des lignes (typiquement: vanne d'admission → colonne chromatographique → détecteur).
Enlever progressivement les vieilles colonnes
Desserrez les écrous des deux extrémités à l'aide d'une clé, retirez d'abord l'extrémité de sortie (près du côté du détecteur) et relâchez lentement le liquide résiduel dans la bouteille de liquide usé.
Après avoir attendu un moment pour décompresser le système, retirez l'extrémité d'entrée.
Il est interdit de tirer la ligne de force pour éviter d'endommager le filetage du joint.
Nettoyage des interfaces et évaluation de l'usure
Vérifiez si la plaque de tamis est bloquée ou déformée et nettoyez - la avec des ultrasons si nécessaire.
Le numéro de série de l'ancienne colonne, la durée d'utilisation et les caractéristiques de défaillance sont enregistrés pour référence ultérieure.
Iii. Points clés de l'installation de la nouvelle colonne
Contrôle de direction
Toutes les colonnes de chromatographie sont clairement identifiées par l'écoulement (les flèches pointent vers la sortie) et l'installation inverse provoque l'effondrement du remplissage.
Une partie de la colonne inversée peut être utilisée tête - bêche, mais la colonne d'échange phase / ions positive doit suivre strictement la direction.
Installation sans bulles
On utilise la « méthode d'accostage sous - liquide »: l'entrée de la nouvelle colonne est immergée dans un bécher muni d'une phase mobile et la ligne est raccordée du côté de l'échappement.
La pompe d'allumage est perfusée à très faible débit (0,2 ml / min) jusqu'à la sortie sans bulles.
Contrôle de couple
Utilisez une clé spéciale pour serrer alternativement les écrous en diagonale, avec une force modérée (une légère résistance au toucher suffit), un serrage excessif peut entraîner une compression du lit de la colonne.
Il est recommandé de vérifier régulièrement le desserrage pendant le fonctionnement après l'installation.
Redémarrage et équilibrage du système
Rinçage initial
La stabilité de la pression de la colonne est observée avec un rinçage à faible débit de composition de phase mobile initiale (mélange proportionnel) pendant 60 minutes.
Si la pression de la colonne est anormalement élevée, la libération peut être suspendue et rincée à l'isopropanol pendant une courte période.
Balance de gradient
Effectuer une procédure de gradient à blanc et surveiller la dérive de base doit être < ± 0,5 Mau.
Le mélange d'essai d'admission vérifie le degré de séparation et compare le nombre de plateaux théoriques pour vérifier la conformité (n ≥ 80% théorique).
Calibration des données
Mettre à jour les informations de la colonne chromatographique dans le fichier de méthode du poste de travail, rétablir le tableau de contrôle du temps de rétention.
Conservez le rapport de certification de la nouvelle colonne, y compris la carte de test d'efficacité de la colonne et la courbe de pression.
La durée de vie de la colonne de chromatographie peut être maximisée par des opérations standardisées, la durée de vie d'une colonne inverse typique pouvant atteindre 500 à 1000 échantillons entrants. L'entretien quotidien recommande un simple rinçage hebdomadaire et un entretien mensuel de régénération en profondeur.