Voici un exposé détaillé sur le mode de conservation de la colonne de chromatographie liquide:

I. Cognition fondamentale et importance des colonnes chromatographiques

Les performances de la colonne de chromatographie liquide en tant que composant central du système de séparation ont un impact direct sur la précision et la répétabilité des résultats analytiques. Les colonnes de chromatographie permettent la séparation des composants de l'échantillon par l'interaction de la phase stationnaire avec la phase mobile, tandis qu'une conservation correcte peut augmenter considérablement la durée de vie (la durée de vie d'une colonne C18 conventionnelle est d'environ 500 à 2000 échantillons), réduire le bruit de base et maintenir la stabilité du nombre de plateaux théoriques. En particulier dans les domaines de l'analyse de substrats complexes tels que les échantillons biologiques, la détection d'additifs alimentaires, etc., la capacité de séparation efficace d'une colonne de chromatographie détermine directement la fiabilité des données.

II. Spécifications d'utilisation quotidienne de la colonne de chromatographie

1. Sélection de phase mobile et prétraitement

Exigences de pureté: un solvant de qualité HPLC doit être utilisé pour éviter que le dépôt d'impuretés ne bloque la tête de colonne. Par exemple, le système méthanol / eau doit être filtré sur une membrane filtrante de 0,45 µm et l'acétonitrile recommande une membrane filtrante de 0,22 µm.

Contrôle du pH: les colonnes en phase inverse (p. ex. C18) s'appliquent à la gamme de pH 2 - 8, au - delà de ce qui peut entraîner la dissolution du squelette de gel de silice. Pour des conditions de pH particulières, une colonne de particules hybrides (p. ex., Waters xbridge Shield) doit être choisie.

Concentration de sel de tampon: la concentration de tampon de phosphate commune ne dépasse pas 50 mmol / L, la Force ionique élevée est facile à discerner la charge de dommage cristallin. Une transition avec de l'eau pure doit être effectuée pendant au moins 30 minutes après la fin de l'expérience.

2. Équilibre du système avant l'échantillonnage

Pré - équilibrage élution Gradient: colonne neuve ou colonne chromatographique inutilisée de longue durée, à rincer avec la phase mobile proportionnelle initiale à faible débit (0,2 ml / min) pendant plus de 2 heures, de manière à ce que la phase stationnaire soit suffisamment humidifiée.

Surveillance de la pression: la fluctuation normale de la pression doit être de l'ordre de ± 5%, s'il y a une poussée de plus de 30%, une plaque de tamis peut être bloquée ou un remplissage s'effondre, une inspection immédiate est requise.

Iii. Stratégie de nettoyage en profondeur de la colonne chromatographique

1. Méthode de rinçage avant

Processus standard: débrancher le détecteur et passer à un mélange Isopropanol: eau = 1: 1, rincer à contre - courant à un débit de 1 ml / min pendant 30 minutes, puis passer à une phase organique pure (méthanol / acétonitrile) pendant 1 heure. Cette méthode élimine plus de 90% des polluants polaires.

Traitement spécial de la contamination: les résidus protéiques sont recommandés pour rincer avec une solution d'urée 6m contenant 0,1% de TFA; La substance lipidique est soniquée par le système n - hexane: isopropanol = 1: 1 pendant 15 minutes.

2. Technologie de régénération in situ

Méthode d'alternance acide - base: pour les adsorbants réfractaires, injecter successivement 0,1 mol / l NaOH → 0,1 mol / l HCl → laver chaque 20 ml à l'eau, en notant qu'il est nécessaire de passer à la phase mobile neutre après chaque commutation. Convient aux colonnes à matrice polymère (par exemple, série PRP).

Nettoyage par fluide supercritique: le fluide co₂ élimine efficacement les impuretés non polaires à 40 ° C, 300 bar et convient particulièrement aux colonnes semi - préparatives de grande taille (≥ 100 Å).

Iv. Gestion du stockage et du transport des colonnes chromatographiques

1. Stockage à court terme (1 mois)

Protection contre les gaz inertes: l'azote chargé déplace l'oxygène interne et inhibe la reproduction microbienne. La colonne de chromatographie peut être placée à l'intérieur d'un récipient hermétique contenant le dessicant.

Contrôle de la température: la température de stockage optimale est de 15 à 25 ° C, à l'abri de la lumière directe du soleil. Dans un environnement à basse température (4 ° c), il doit être restauré à la température ambiante avant d'être activé.

V. Résumé

La conservation scientifique de la colonne de chromatographie devrait établir le concept de « prévention primaire, combinaison de traitement et de conservation», développer un journal de maintenance détaillé pour enregistrer le nombre d'utilisations, les changements de pression et l'historique des réparations. Il est recommandé d'effectuer des essais d'intégrité tous les trimestres (p. ex. essai de l'efficacité de la colonne pour les étalons au benzoate de sodium) et de déterminer que la fin de vie utile est atteinte lorsque le nombre théorique de plateaux tombe à 70% de la valeur initiale. Grâce à des processus opérationnels normalisés et à des moyens de gestion intelligents, la colonne de chromatographie peut toujours fonctionner de manière optimale, garantissant la précision et la fiabilité des données analytiques.