Le système d'imagerie de l'environnement cellulaire est capable de capturer des images haute résolution qui montrent clairement la structure subtile et les processus dynamiques de la cellule. Cela a des implications importantes pour l'étude des mécanismes internes des cellules, des lois du développement de la maladie et des effets de l'action des médicaments. Les données d'image détaillées et précises fournies par le système permettent aux chercheurs d'observer et de comparer à différents moments et dans différentes conditions, garantissant ainsi la cohérence et la fiabilité des expériences. En outre, ces données peuvent être utilisées pour des analyses statistiques qui révèlent des lois et des mécanismes biologiques sous - jacents qui fournissent un soutien solide à la recherche scientifique.
Une grande valeur d'application dans de nombreux domaines tels que le développement de médicaments, la recherche sur le cancer, la biologie du développement, etc. Il peut aider les chercheurs à mieux comprendre les interactions entre les cellules et le microenvironnement, à explorer les mécanismes d'apparition des maladies et à évaluer l'efficacité des médicaments, accélérant ainsi le processus de recherche et de développement de nouveaux médicaments et faisant progresser les sciences de la vie. Les fonctions de commande automatisées du système réduisent le besoin d'intervention humaine et réduisent la difficulté opérationnelle et le taux d'erreur. Dans le même temps, des capacités de traitement et d'analyse des données efficaces améliorent considérablement l'efficacité de la recherche, permettant aux chercheurs d'accéder plus rapidement à des résultats de recherche précieux.
Étapes de détermination du système d'imagerie de l'environnement cellulaire:
Conception expérimentale: lors de la conception d'un protocole expérimental d'imagerie de cellules vivantes, divers facteurs doivent être pris en compte, tels que les processus cellulaires à observer, les méthodes de marquage utilisées, etc. Parce que l'imagerie cellulaire vivante présente de nombreux avantages, notamment la capacité d'observer l'apparition de processus cellulaires dynamiques, d'étudier simultanément plusieurs aspects à l'aide de tests multicolores, d'étudier les structures dans l'environnement natif des cellules pour obtenir des résultats plus réalistes, de suivre les biomolécules et les structures au fil du temps et d'observer les interactions intercellulaires. Mais il est également important de prêter attention à des questions telles que l'existence de méthodes spécifiques de faible toxicité pour étiqueter les cibles de recherche, la difficulté de garder les cibles mobiles ciblées en raison de l'imperméabilité des cellules vivantes à certaines grandes molécules testées, et la nécessité de déterminer si la technologie utilisée est nocive pour les cellules et de garantir leur état physiologique naturel.
2. Culture cellulaire: il est essentiel de maintenir ou de cultiver les cellules dans des conditions optimales. Le choix du milieu de culture est particulièrement critique pour les expériences d'imagerie Time - Lapse et d'exposition prolongée à l'environnement. Pour obtenir des résultats expérimentaux fiables, il faut s'assurer que les cellules sont en bonne santé et dans un environnement approprié aussi proche que possible de la température physiologique, du pH, des niveaux d'oxygène et d'autres conditions.
3. Marquage cellulaire: marquage ciblé de la structure cellulaire, de la fonction et des protéines cibles à l'aide de colorants spécifiques et de réactifs de marquage fluorescents. Un colorant Fluorescent approprié doit être choisi, par example une Protéine fluorescente spécifiquement ciblée ou un petit agent de perméabilité membranaire. Pour détecter plusieurs structures et processus simultanément, vous pouvez utiliser d'autres colorants fluorescents, mais avec Fluorescence spectraviewer, vous pouvez vérifier les spectres d'excitation et d'émission afin de minimiser les chevauchements spectraux entre les différents colorants. Dans le même temps, évitez l'utilisation excessive de marqueurs fluorescents en cas de problèmes tels que la coloration non spécifique, l'amélioration du signal de fond, les artefacts physiologiques, les perturbations structurelles, la Cytotoxicité et les chevauchements spectraux graves.
4. Optimisation du signal: faites de votre mieux pour réduire les interférences de fond et maintenir la stabilité optique du signal Fluorescent. Des agents qui réduisent la fluorescence extracellulaire et améliorent la photostabilité des colorants fluorescents peuvent être utilisés pour améliorer le rapport signal sur bruit. La sélection d'inhibiteurs de fond appropriés pour les cellules vivantes contribue à réduire la fluorescence de fond extracellulaire et ne nécessite pas d'étape de nettoyage supplémentaire; Les échantillons peuvent également être traités avec des réactifs anti - trempe de cellules vivantes pour éviter la perte de signal causée par des expositions multiples ou prolongées.
Observation d'imagerie: pour l'imagerie de cellules vivantes de processus dynamiques, une observation à long terme est nécessaire. Dans ce processus, il est nécessaire de contrôler raisonnablement les conditions d'éclairage et de détection pour garantir l'acquisition de données d'image de haute qualité.
6. Opération d'allumage: Ouvrez le commutateur de contrôleur de système de culture cellulaire, le commutateur de champ ouvert, le commutateur de lampe de mercure et le commutateur de microscope d'abord; Ensuite, allumez l'interrupteur de dioxyde de carbone pour maintenir la pression de dioxyde de carbone stable en dessous de 0,1 MPa; Ajouter ensuite la bonne quantité d'eau à haute pression dans le système de culture cellulaire et placer les cellules; Après cela, ouvrez le logiciel de contrôle du système d'imagerie et laissez le CCD pré - refroidir; Recherchez un champ de vision approprié sous le miroir, effectuez une photographie d'imagerie de cellules vivantes après avoir réglé les paramètres pertinents.
7. Opération d'arrêt: Fermez d'abord le logiciel de contrôle du système d'imagerie; Éteignez ensuite les interrupteurs du Contrôleur du dioxyde de carbone, du champ ouvert, de la lampe au mercure et du système de culture; Fermer ensuite le microscope; Puis éteindre toute alimentation électrique; Les cellules sont retirées et le système de culture est nettoyé.