Le système d'imagerie de l'environnement cellulaire peut surveiller l'état de croissance des cellules, les changements morphologiques et l'activité métabolique en temps réel, ce qui aide les chercheurs à comprendre plus précisément l'état physiologique et la réponse des cellules. En enregistrant et en analysant régulièrement les données d'image, les anomalies telles que la Cytotoxicité, les carences nutritionnelles ou les infections pathogènes, entre autres, peuvent être détectées à temps, ce qui permet d'optimiser les conditions de culture cellulaire ou de résoudre les problèmes.
Principe de fonctionnement de base d'un système d'imagerie de l'environnement cellulaire:
1. Technologie d'imagerie optique: le système d'imagerie de l'environnement cellulaire utilise une structure de microscope inversée, intégrant des composants optiques tels que le condenseur à contraste de phase, l'objectif et d'autres. Ces composants travaillent ensemble pour permettre à la lumière de briller avec précision sur l'échantillon cellulaire observé et de collecter la lumière réfléchie ou transmise pour former une image claire. Dans le même temps, en combinaison avec une caméra haute sensibilité, il peut convertir le signal optique en image numérique, prendre en charge de nombreux modes d'imagerie tels que le champ clair, la fluorescence et les effets de relief, afin de répondre à différents besoins expérimentaux.
Marquage fluorescent et observation dynamique: en utilisant des colorants fluorescents spécifiques, il est possible de marquer des protéines ou des organites spécifiques dans les cellules. Grâce à la microscopie à fluorescence, il est possible de transformer l'activité des cellules d'un « instantané» statique en un « film» dynamique montrant l'activité à l'intérieur des cellules en temps réel, comme le transport moléculaire, l'interaction entre les organes.
3. Contrôle automatique et entretien de l'environnement: il est également équipé d'un système de contrôle automatique, capable de réguler avec précision les paramètres environnementaux tels que la température, l'humidité, la concentration de dioxyde de carbone et d'autres, afin de fournir aux cellules un environnement de croissance stable et approprié. Cela garantit non seulement l'activité des cellules au cours de l'expérience, mais réduit également les perturbations dues aux changements des facteurs environnementaux et améliore la précision et la fiabilité de l'expérience.
Précautions d'utilisation des systèmes d'imagerie de l'environnement cellulaire:
Spécifications d'utilisation de la lampe au mercure: L'interrupteur de la lampe au mercure ne doit jamais être allumé fréquemment et à plusieurs reprises, l'intervalle entre les deux interrupteurs doit atteindre plus de 30 minutes, sinon il peut affecter la durée de vie et les performances de la lampe au mercure.
2. Contrôle de la température ambiante: la Chambre de microscope doit maintenir un environnement à basse température, une température stable peut aider à maintenir la précision de l'instrument et l'état des cellules, réduire les erreurs dues aux fluctuations de température.
3. Protection contre la lumière et les chocs: Faites attention à l'évitement de la lumière pendant l'expérience pour empêcher la lumière de causer des dommages aux cellules ou d'interférer avec les résultats de l'expérience; Évitez également les secousses, car les secousses peuvent causer des problèmes tels que le flou de l'image, le décalage de la mise au point, etc., affectant la qualité de l'image.
4. Points clés de la sélection du milieu de culture: lors de la préparation des échantillons, la formulation du milieu de culture utilisé doit non seulement contenir les nutriments appropriés pour la croissance et le développement des cellules, mais également tenir compte de facteurs tels que le pH, la capacité tampon et l'osmolalité. Des milieux inappropriés peuvent affecter l'expression cellulaire, le phénotype et le comportement apparent. Il est recommandé d'utiliser un milieu sans rouge de phénol et de réduire les concentrations sériques afin de réduire le signal de fond.
5. Exigence d'opération stérile: dans le processus d'opération comme la collecte des cellules, l'opération stérile doit être strictement effectuée pour empêcher la contamination. Les particules étrangères ou les débris cellulaires peuvent interférer avec la qualité de l'image et affecter la précision expérimentale.
Nécessité d'optimisation de la sonde: Avant d'effectuer des expériences formelles, la concentration et le temps d'incubation de la sonde fluorescente doivent être optimisés. Assurez - vous à la fois que la viabilité cellulaire n'est pas affectée après l'incubation et que l'intensité appropriée du signal de fluorescence est détectée. De plus, la fluorescence de fond potentielle peut être réduite en ajoutant une étape de lavage.
Conditions environnementales stables: des conditions environnementales stables, y compris la température, l'humidité et les gaz (oxygène et dioxyde de carbone), sont strictement contrôlées et maintenues tout au long de l'expérience d'imagerie. Un environnement stable maintient non seulement les cellules en bonne santé, mais réduit également le risque de dérive focale. Par exemple, avant de configurer les paramètres d'acquisition, il faut s'assurer que la microplaque est équilibrée thermiquement sur le banc d'instruments ou dans la salle de contrôle de l'environnement; Si vous ajoutez un milieu dans le trou au cours d'une expérience de temporisation, assurez - vous qu'il est à la même température que le milieu à l'intérieur du récipient d'imagerie.
8. Application du module de chauffage de l'objectif: pour les expériences utilisant l'imagerie de miroir d'eau ou de miroir d'huile, la température de l'objectif aura un grand impact sur l'échantillon en raison du contact de l'objectif avec l'échantillon à travers le milieu, à ce stade, il est nécessaire d'équiper le Module de chauffage de l'objectif pour s'assurer que l'échantillon est dans un environnement de température approprié.
Utilisation du système de contrôle de la mise au point: utilisez pleinement les fonctions telles que la fonction de mise au point automatique du logiciel (comme bestfocus), le système de stabilisation de la mise au point (AFC) et la mise au point précise (closeloop) pour garantir des images nettes à différents moments et améliorer la qualité de l'image et la précision des données.
10. Jeu d'avantage de surveillance à distance: si l'équipement a une fonction de surveillance à distance, il peut être raisonnablement utilisé pour surveiller la progression de l'expérience en temps réel, détecter et résoudre les problèmes à temps, améliorer l'efficacité et le succès de l'expérience.