La colonne de chromatographie préparative HPLC est un outil essentiel pour la séparation et la purification de composés chimiques dans la technologie de chromatographie liquide haute performance.

- tube de colonne: généralement en acier inoxydable ou en verre avec une bonne résistance à la pression et la stabilité chimique. Le diamètre intérieur du tube de la colonne détermine la quantité de charge et l'échelle de séparation de la colonne de chromatographie, le diamètre intérieur de la colonne de chromatographie de préparation générale est dans la gamme 50 - 200 mm.

- Charges: est la partie centrale de la colonne de chromatographie, les charges communes sont le gel de silice, l'alumine, les microsphères de polymères organiques, etc. Les charges de la matrice de gel de silice ont une meilleure résistance mécanique et une meilleure stabilité chimique, en liant différents groupes fonctionnels tels que C18, C8, C4, etc., il est possible d'obtenir une séparation des différents composés polaires.

- plaques de tamis: situées aux deux extrémités du tube de la colonne, elles servent à supporter le remplissage et à éviter les fuites de remplissage, tout en garantissant un passage homogène de la phase mobile à travers la colonne de chromatographie.

Étapes d'utilisation pour la préparation de colonnes de chromatographie HPLC:

1. Travaux préparatoires

- contrôles de sécurité: assurer la sécurité des zones de laboratoire, porter des équipements de protection individuelle tels que des vêtements de laboratoire, des gants et des lunettes de protection.

- inspection de l'instrument: Vérifiez l'état de l'équipement HPLC et assurez - vous que les composants tels que la colonne, le détecteur, la pompe, etc. fonctionnent correctement. Allumez le système HPLC, réglez la température appropriée, le débit et d'autres paramètres pour que le système atteigne un état stable.

- Préparation de la phase mobile: la phase mobile est formulée selon les exigences expérimentales, le solvant ou la phase mobile est filtré avec du papier filtre de 0,2 µm et dégazé aux ultrasons pour en éliminer les bulles et les impuretés.

- Préparation de l'échantillon: dissoudre l'échantillon à tester avec un solvant approprié et diluer à la concentration appropriée, de même filtrer avec une membrane filtrante de 0,2 μm, en veillant à ce que la solution de l'échantillon soit claire et exempte d'impuretés.

2. Installer la colonne de chromatographie: installez la colonne de chromatographie préparée dans le système HPLC, faites attention à ce que la connexion soit serrée pour éviter les fuites de liquide. L'apparence de la colonne de chromatographie peut être vérifiée avant l'installation pour des dommages, etc.

3. Équilibre du système: rincer la colonne de chromatographie avec la phase mobile, le temps de rinçage général est de 15 - 30 minutes jusqu'à ce que la ligne de base soit lisse pour s'assurer que la colonne de chromatographie est pleine de phase mobile et atteint l'état d'équilibre.

4. Détermination de l'échantillon entrant: Sélectionnez la méthode d'échantillonnage appropriée et la quantité d'échantillon entrant pour injecter l'échantillon dans le système HPLC. Commencez à collecter des données, enregistrez le temps de rétention des pics chromatographiques, la largeur des pics, les informations de hauteur des pics.

5. Traitement et analyse des données: sur la base des données enregistrées, les paramètres pertinents de la colonne de chromatographie, tels que le nombre de plateaux théoriques, le facteur d'asymétrie, le degré de séparation, etc., sont calculés pour évaluer les performances de la colonne de chromatographie. Les méthodes courantes de traitement des données comprennent la détermination de la surface des pics, la détermination de la hauteur des pics, l'analyse quantitative et qualitative, entre autres.

Nettoyage et conservation de la colonne de chromatographie: une fois la détermination terminée, laver la colonne de chromatographie avec un solvant approprié pour éliminer les échantillons résiduels et la phase mobile. Pour les colonnes de chromatographie en phase inverse, elles sont généralement rincées d'abord au méthanol ou à l'acétonitrile puis à l'eau pure; Pour les colonnes de chromatographie en phase normale, on peut rincer avec un solvant organique tel que le n - hexane. Une fois le lavage terminé, la colonne de chromatographie est bien conservée pour éviter le séchage et la contamination.