Perles magnétiques chimiluminescentesDans le processus de détection, il est sensible aux performances des billes magnétiques, aux conditions de fonctionnement, au système de réaction, et des problèmes tels que l'agglomération des billes magnétiques, l'anomalie du signal lumineux, la mauvaise répétabilité de la détection et d'autres se produisent. Pour les problèmes de base, il peut être résolu efficacement en optimisant la sélection des matériaux, en ajustant les paramètres de fonctionnement et en spécifiant le mode de conservation.

1. Problème un: les perles magnétiques se réunissent, ne peuvent pas être dispersées uniformément

L'agglomération des billes magnétiques entraîne une réduction de la surface de contact réactif, affectant directement la sensibilité de détection.

- * * causes communes * *:

1. Les groupes de modification de surface des billes magnétiques (tels que carboxy, amino) ont une densité insuffisante et une faible force de répulsion mutuelle.

2. Volatilisation du liquide de conservation ou changement de concentration d'ions qui perturbe la stabilité colloïdale.

3. Congélation et dégel répétés lors de l'opération, entraînant une agrégation secondaire des billes magnétiques.

- * * solution * *:

1. Choisissez des billes magnétiques avec une densité de modification élevée (par exemple, densité de carboxyle ≥ 20 μmol / g) pour assurer la dispersion.

2. Scellé à l'abri de la lumière lors de la conservation, ajouter un liquide de conservation spécial (par exemple, PBS avec 0,02% d'azide de sodium) pour éviter les fluctuations de concentration.

3. Bien mélanger avec l'oscillateur à tourbillon Après décongélation (1000 - 1500rpm, 30 secondes), interdire les chocs violents.

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2. Deuxième problème: signal lumineux faible, limite inférieure de détection non conforme

L'intensité du signal lumineux détermine directement la sensibilité de détection et un signal faible est souvent associé à une faible efficacité de réaction.

- * * causes communes * *:

1. L'efficacité de couplage des billes magnétiques et des anticorps / antigènes est faible et les sites de liaison insuffisants.

2. L'activité des substrats luminescents (par exemple, Luminol, acridate) diminue ou est ajoutée en quantité insuffisante.

3. La température de réaction s'écarte de la plage optimale (généralement 25 - 37 ° c) et l'activité enzymatique est inhibée.

- * * solution * *:

1. Optimisez les conditions de couplage: Ajustez le pH (par exemple, pH = 5,0 - 6,0 lors du couplage des billes magnétiques carboxyliques), ajoutez l'activateur EDC / NHS, améliorez l'efficacité du couplage à plus de 80%.

2. Utilisez un substrat Luminescent fraîchement formulé, contrôlez la quantité avec précision (par exemple, 100 μl / puits) selon les instructions, évitez la congélation et la dégel répétées.

3. L'utilisation de l'incubateur thermostatique (± 0,5 ℃ précision) pour assurer la température de réaction stable et éviter les fluctuations de la température ambiante affectant l'activité enzymatique.

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3. Troisième problème: mauvaise répétabilité de détection, valeur de CV trop élevée

Une mauvaise répétabilité (CV > 10%) peut conduire à des résultats peu fiables, souvent liés à la cohérence opérationnelle ou systémique.

- * * causes communes * *:

1. Grande erreur de volume lorsque les billes magnétiques sont échantillonnées (par exemple, la précision de la pipette est insuffisante).

2. Le temps de séparation magnétique est incohérent, ce qui entraîne une quantité résiduelle différente de billes magnétiques non liées.

3. L'étape de lavage n'est pas normalisée, les impuretés résiduelles interfèrent avec la réaction de Luminescence.

- * * solution * *:

1. Utilisez une pipette de haute précision (par exemple, 10 - 1000 μl, erreur ≤ ± 1%), calibrée avant l'échantillonnage pour assurer un volume uniforme par trou.

2. Réglez le temps de séparation magnétique fixe (par exemple 5 minutes), utilisez le support magnétique avec la fonction de synchronisation pour éviter les fluctuations de temps.

3. Utilisez l'étape "tremper - aspirer" lors du lavage (par exemple, ajouter 200 μl de liquide de lavage par puits, aspirer après 30 secondes d'immersion), répétez 3 fois pour vous assurer que le liquide résiduel est < 5 μl.

4. Quatrième problème: les billes magnétiques se déposent rapidement, stratifient pendant la réaction

Une sédimentation trop rapide des billes magnétiques peut entraîner une réaction inadéquate, affectant l'uniformité des résultats, en particulier pendant la phase d'incubation.

- * * causes communes * *:

1. La taille des billes magnétiques est trop grande (par exemple > 500 nm), l'action de la gravité est supérieure à la force de dispersion.

2. La viscosité du système de réaction est faible et ne peut pas soutenir la suspension de billes magnétiques.

- * * solution * *:

1. Choisissez des billes magnétiques de taille de particule adaptée (100 - 300nm recommandé pour la détection conventionnelle), équilibrez la dispersion avec la vitesse de réponse magnétique.

Ajouter une petite quantité d'épaississant (par exemple 0,1% BSA) dans le liquide réactionnel pour augmenter la viscosité du système et ralentir la vitesse de sédimentation; Mélanger doucement 1 fois toutes les 10 minutes pendant l'incubation (500 RPM, 10 secondes).