Introduction

L'aconite, l'aconite dans l'épiphyte, la STRYCHNINE dans le cheval et la STRYCHNINE sont des alcaloïdes très toxiques, des traces peuvent entraîner une intoxication grave et même la mort. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise contient encore près de 60 médicaments chinois et variétés de plantes médicinales chinoises qui utilisent des contrôles de l'Aconitine et de la strychnine, en tant que substances hautement toxiques strictement contrôlées, le Ministère de la sécurité publique a demandé que les contrôles correspondants ne soient plus délivrés [1]. Afin d'assurer la science, la rationalité et l'applicabilité des normes de pharmacopée, il est urgent de remplacer l'Aconitine et la STRYCHNINE par un extrait témoin d'alcaloïdes de type aconite - Diester, alcaloïdes totaux de l'aconite. Dès 2016, l'Institut chinois de recherche sur l'examen des aliments et des médicaments a commencé ses travaux de recherche connexes [2] [3]; Récemment, la Commission nationale de pharmacopée a achevé la révision de 57 variétés pertinentes et les a incluses dans l'édition 2025 de la pharmacopée chinoise [1].

Alcaloïdes de type Aconite diester

Alcaloïdes de type aconite - bis - ester (aconite, subaconite, néoaconite, etc., très toxique) après avoir été concocté (trempage, cuisson à la vapeur, blanchiment de sable, etc.), l'hydrolyse de l'acétyle en position C - 8 conduit à des alcaloïdes de type aconite - monoester (par exemple, benzoylaconite, benzoylnéoaconite, benzoylisoaconite, etc., faiblement toxique), tandis que l'hydrolyse du benzoyle en position C - 14 conduit à des alcaloïdes de type aconitolamine (par exemple, aconite, néoaconite, néoaconite, néoaconite, etc., légèrement toxique).[4], comme le montre la figure 1.

Les alcaloïdes de type aconite - Diester contenus dans le chuanu (大大), le kuanu (大大) et l'épiphyte sont principalement l'aconite, la subaconitine, la néoaconitine, etc., tandis que les alcaloïdes de type aconite - Diester contenus dans le Huanghua (大大) sont principalement la dianaconite, l'oxagurétine, etc.[5]La teneur en alcaloïdes de contrôle de type aconite - Diester actuellement disponible dans le commerce est mesurée en néoaconite, sous - Aconitine, Aconitine, et la détermination des alcaloïdes de type aconite - Diester dans certaines variétés pharmaceutiques chinoises, perturbée par la matrice de l'échantillon est plus grave. Le laboratoire symerfly a mis au point une nouvelle méthode de dosage couvrant 5 alcaloïdes de type aconite - bis - ester et 3 alcaloïdes de type aconite - monoester, afin de faciliter un contrôle plus complet de la qualité des préparations concernées par les entreprises pharmaceutiques.

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Figure 1 8 formules structurelles aconites

Carte des caractéristiques des appendices bruts symerfly solutions complètes d'application

01

Préparation de la solution de contrôle et de la solution d'essai

Les 8 solutions de contrôle de l'Aconitine ont été achetées auprès de fournisseurs de produits standard, et 2 lots de solutions d'épandage brut de jiangho ont été fournis par les clients.

Préparation de la solution témoin:Prendre benzoyl néoaconite contrôle de base, benzoyl néoaconite contrôle de base, benzoyl subaconite contrôle de base, néoaconite contrôle, aconite contrôle, subaconite contrôle de base, dianaconite contrôle, aconite brut aconite a (oxalurone) contrôle de la solution de quantité appropriée, la précision, plus l'acétonitrile pour faire une solution de mélange contenant chacun 10 μg par 1 ml, à savoir.

Préparation de la solution à tester:Prendre la poudre de ce produit environ 1,0 G, calibré avec précision, placé dans un tube à essai en verre bouchon de 25 ml, ajouter avec précision une solution mixte d'Isopropanol - acétate d'éthyle (1: 1) de 10 ml (contenant de l'ammoniac 0,6 ML), un bouchon, un bain d'eau glacée extraction par ultrasons pendant 30 minutes, la température ambiante a laissé décanter. Prélever 5 ml de surnageant dans un tube de centrifugation de 15 ml, 8000 RPM 20 ℃ centrifuger pendant 5 min, exactement prendre 4,00 ML dans un tube de soufflage d'azote propre dans un bain d'eau de 30 ℃ azote soufflé à presque sec, ajouter exactement 2,00 ml de resolve d'acétonitrile (Vortex / ultrasons / vortex), 5000 RPM 20 ℃ centrifuger pendant 3 min, la solution complexe a traversé une membrane de filtration de PTFE hydrophile de 0,2 µm (P / N: 42213 - NPL), le filtrat à tester.

Méthode de détermination:Aspirer avec précision la solution de contrôle et la solution d'essai de 5 μl chacun, injecter dans un chromatographe liquide, déterminer, i.e.

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02

Configuration de l'instrument et conditions chromatographiques

Thermo Scientific ™ Vanquish Core ™ Système de chromatographie liquide à haute performance, configuration: pompe Quaternary Pump C (VC - p20 - a), échantillonneur automatique Split Sampler CT (VC - A12 - a), thermostat colonne column Compartment C (VC - C10 - a), détecteur Diode Array Detector CG (VC - d11 - a), traitement de données chromeleon ™ 7.3

色谱柱： Acclaim WCX-1 en mode mixte, 3 μm, 3,0 x 150 mm (P/N: 070092)

Phase mobile: A: eau Ultrapure B: 100 mm (NH)4(H)2PO4(l'acide phosphorique ajuste le pH à 3,0) C: acétonitrile

Débit: 0,5 ml / min

Procédure d'élution Gradient: voir détails accessoires applications Solutions

Quantité d'échantillon: 5 µl

Température de la colonne: 40 ℃

Détecteur: Dad, longueur d'onde d'acquisition: 230 / 260 nm; fréquence d'acquisition: 5 Hz; acquisition spectrale: 190 - 400 nm

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03

Cartes spectrales et données

3.1

Spectrogramme de solution de contrôle

Figure 2 profils de séparation et données (10,0 μg / ML) pour 8 solutions de contrôle mixtes d'Aconitine (cliquez pour agrandir l'image)

Figure 3 spectrogramme de localisation de 8 solutions de contrôle unique de l'Aconitine (10,0 μg / ML) (cliquez pour l'agrandir)

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8 aconites dans la solution d'essai peuvent réaliser une séparation efficace, dont 5 aconites de type bisester alcaloïdes ont une bonne forme de crête, excellente efficacité de la colonne, quasi - certitude et quantification; La benzoylaconitine et la benzoylhypoconitine dans 3 alcaloïdes de type monoester d'aconite n'ont pas été isolées au départ et peuvent être utilisées pour l'analyse qualitative préliminaire.

3.2

Spectrogramme de solution pour essai

Figure 4 spectrogrammes et données de séparation des solutions d'éprouvettes crues (S1)

(cliquez pour l'agrandir)

Figure 5 spectrogrammes et données de séparation des solutions d'éprouvettes crues (s2)

(cliquez pour l'agrandir)

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Les deux lots d'épiphytes secondaires ont été détectés dans l'aconithine, l'aconithine secondaire et la néoaconithine, les pics cibles peuvent atteindre la séparation de base et la quantification quasi certaine, tandis que ni la dianaconithine ni l'oxalanine n'ont été détectés.

3.3

Carte des caractéristiques des appendices bruts

Figure 6 spectrogramme des pics adjacents de la néoaconitine dans la solution d'épiphytes crues pour essai

(cliquez pour l'agrandir)

À 230 nm, deux pics inconnus peuvent être distingués avant et après le pic cible de néoaconitine dans la solution d'essai d'attache crue, identifiée par spectrogramme, soupçonnée d'être d'autres types d'alcaloïdes de type bisester d'aconite, qui peuvent ensuite être étudiés en conséquence.

Figure 7 6 spectrogrammes de superposition de solutions de contrôle de l'Aconitine avec des solutions de comprimés bruts pour essai (cliquez pour l'agrandir)

Episode cru pour la solution d'essai dans le diagramme de superposition d'échantillon continu, chaque temps de rétention de pic cible et la zone de PIC sont stables, RSD sont tous inférieurs à 1%, excellente reproductibilité et stabilité de la méthode, peut être utilisé pour l'établissement d'un profil caractéristique d'alcaloïde de type aconite - bisester Dans les episodes crus.

04

Résultats et discussion

1)Ce test utilise une colonne de chromatographie en mode mixte acclaim Mixed - mode wcx - 1 (phase inverse + échange cationique faible) et une phase mobile sans réactif de paire d'ions ou tétrahydrofuranne, combinée avec le système de chromatographie liquide haute performance Vanquish Core, qui permet de séparer efficacement 8 bases d'aconite, dont 5 bioalcaloïdes de type aconite - Diester ont une bonne formation de crête, une excellente efficacité de la colonne, une certitude et une quantification précises, et 3 alcaloïdes de type aconite - Diester peuvent être utilisés pour l'analyse qualitative préliminaire.

2)L'optimisation des conditions chromatographiques pour la séparation des 5 alcaloïdes de type aconite - Diester dans la solution d'essai a permis de distinguer deux pics inconnus avant et après le pic de néoaconite et d'identifier par spectrographie les alcaloïdes soupçonnés d'être d'autres alcaloïdes de type aconite - Diester, alors que ni la dianaconite ni l'oxalanine n'ont été détectées.

3)Cette méthode s'applique à la fois à la surveillance du degré d'hydrolyse de l'aconite dans le processus de fabrication des épizoons crus et à la traçabilité de l'origine des matériaux pharmaceutiques Dodge des épizoons Chuan et Dian.

5. Références

[1] LI Hao, Shen mingyru, ZHANG Peng, et al. Introduction à un contenu majeur de la pharmacopée chinoise, édition 2025 [j]. Normes pharmaceutiques chinoises, 2025, 26 (01): 17-22.doi: 10.19778 / j.chp.2025.01.003.

[2] ZHU Yue, Wang ruizhong, Zhang Yimei, et al. Étude sur la préparation et l'application d'un extrait témoin d'aconite de type Diester [j]. Norme pharmaceutique chinoise, 2016,17 (04): 252-257.doi: 10.19778 / j.chp.2016.04.003.

[3] Wang Fifi, Wu shouhai, Zhang Yimei, et al. Étude des extraits témoins de Marcus et leur application au contrôle de la qualité des produits pharmaceutiques et des préparations complexes de Marcus [j]. Journal of Drug Analysis, 2018,38 (07): 1226-1230.doi: 10.16155 / j.0254-1793.2018.07.18.

[4] Hu Jiahao, Li wengyi, Shi Qingxin, etc. Progrès dans la recherche sur la composition chimique des épizoons et les procédés de cuisson [j]. Chinese Journal of Chinese Medicine, 2025,50 (06): 1458-1470.doi: 10.19540 / j.cnki.cjcmm.20241214.201.

[5] Xu Yi, Qin Bo, Cao Hongyun, et al. La méthode HPLC détermine simultanément la teneur en dianubicine et en oxaluminine dans l'oxalose [j]. Yunnan Journal of Chinese Medicine, 2017,38 (09): 70-72.doi: 10.16254 / j.cnki.53-1120 / r.2017.09.033.

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