Flacons de détection rapide microbienne: diagnostics

　　Détection rapide microbienneFlacons: Diagnostiques

1. En plus de détecter des bactéries viables, les flacons de détection microbienne peuvent-ils également détecter des bactéries mortes?

Réponse : Non, ils ne peuvent pas détecter les bactéries mortes.

2. Les flacons de détection microbienne peuvent-ils détecter des bactéries anaérobies?

Réponse: La gamme de détection de ces flacons englobe à la fois les bactéries anaérobies (telles que Clostridia réduisant le sulfite et *Clostridium perfringens*) et les bactéries aérobies.

Les réactifs contenus dans les flacons de détection varient en fonction du type spécifique de micro-organisme visé. Pour les bactéries anaérobies, comme Clostridium perfringens, nous utilisons des réactifs spécialisés.

3. Quelles méthodes de détection spécifiques sont utilisées dans les principes de détection de ces flacons?

Réponse : Méthodes à base de culture, méthodes enzymatiques, méthodes immunologiques et méthodes génétiques.

4. En ce qui concerne la question 3, pourriez-vous décrire brièvement les avantages et les inconvénients de chacune de ces méthodes?

Réponse: Contrairement aux méthodes traditionnelles de culture, aux analyses d'or colloïdale, aux immunoassays enzymatiques ou aux méthodes de PCR - lorsqu'elles sont utilisées isolées - le système allemand de détection microbienne représente une intégration complète de multiples techniques. L'utilisation d'une seule méthode de détection présente des inconvénients inhérents; par exemple :

Les méthodes de PCR nécessitent un personnel technique spécialisé et un équipement coûteux;

Les méthodes des médias culturels impliquent des procédures opérationnelles complexes;

Les analyses d'or colloïdale souffrent d'une faible sensibilité;

Les immunoassays enzymatiques peuvent manquer de spécificité suffisante dans la capture cible.

La série allemande de flacons de détection microbienne rapide représente une application synergique des méthodes susmentionnées, exploitant efficacement les forces de chaque technique tout en compensant leurs limites respectives.

5. Lors de la détection microbienne à l'aide de ces flacons, l'échantillon doit-il être ajouté d'abord, ou l'eau stérile?

Réponse: Chaque commande est acceptable. 6. Est-il nécessaire d'effectuer une inoculation microbienne de l'échantillon dans un environnement stérile?

Réponse : La bouteille de détection fonctionne en capturant des cibles spécifiques et en utilisant une combinaison de méthodes d'analyse. Par conséquent, un environnement stérile n'est pas strictement requis (la plupart des sites d'essais cliniques sont, en fait, des environnements non stériles).

7. La bouteille de détection peut-elle être utilisée pour tester des échantillons de surface et des échantillons solides?

Réponse: Oui, il peut tester des échantillons solides, liquides et de surface (pour les échantillons de surface, utilisez le tampon fourni humidifié avec de l'eau stérile pour tamponner la surface). Des échantillons pâteux, semi-solides ou visqueux, tels que la pâte de papier, peuvent également être testés.

8. Lors de l'essai d'échantillons solides avec la bouteille de détection, est-ce qu'un prétraitement, tel que le broyage ou la dilution, est nécessaire?

Réponse : Non ; il suffit de placer l'échantillon directement dans la bouteille de détection sans traitement préalable.

9. Combien d'eau stérile est nécessaire pour chaque test?

Réponse: Généralement, 11 ml. Si vous testez des échantillons liquides ou des échantillons d'eau, il est recommandé d'ajouter 1 ml de l'échantillon et 10 ml d'eau stérile.

10. Après avoir ajouté l'échantillon et l'eau stérile, l'étape de "secouer pour assurer la dissolution complète et le mélange" est-elle une procédure obligatoire pour l'analyse qualitative et quantitative?

Réponse: Oui, secouer pour mélanger est une étape obligatoire pour l'analyse qualitative et quantitative.

11. Différents micro-organismes ont-ils besoin de la même température d’incubation? Veuillez donner des exemples.

Réponse : Non, ils ne le font pas. La plupart des micro-organismes ont besoin de 37 ° C, comme le nombre total viable, * Salmonella * et * Listeria *, tandis que d'autres, comme * E. coli *, ont besoin de 44 ° C.

12. Si des échantillons de test tels que des plats froids ou de la crème glacée, l'incubation doit-elle être menée à une température plus basse? Réponse: Il n'y a aucune restriction concernant la température de l'échantillon lui-même. Cependant, lors des tests de microorganismes dans l'échantillon, vous devez respecter strictement la température d'incubation spécifique correspondant au microorganisme cible, comme indiqué dans le tableau de référence.

13. Si je souhaite accélérer le processus d ' essai, puis-je régler la température d ' incubation plus élevée que la température spécifiée pour le micro-organisme cible?

Réponse : Non. Vous devez respecter strictement le tableau de référence.

14. Quel est le volume/poids spécifié de l'échantillon requis par le manuel d'utilisation?

Réponse : 0,1 g – 1,0 g ou 0,1 mL – 1,0 mL.

15. Si le volume/poids réel de l ' échantillon dépasse la limite spécifiée, les résultats de l ' essai différeront-ils? Plus précisément, les résultats (dans le cas de l’analyse quantitative) apparaîtront-ils artificiellement élevés ?

Réponse : Que le volume/poids de l'échantillon soit légèrement supérieur ou inférieur à celui spécifié, les résultats de l'analyse quantitative ne seront pas affectés.

Les méthodes d'essai microbiologiques traditionnelles, y compris les méthodes de référence établies (comme le comptage des colonies sur des milieux sélectifs solides), présentent une "dispersion statistique" inhérente supérieure à 50 %. (La dispersion statistique, également appelée variabilité statistique, fait référence à la propagation d'une variable ou d'une distribution de probabilité; les exemples courants comprennent la variance, l'écart-type et la plage interquartile.) De nombreux laboratoires ont confirmé que les méthodes de détection biologique démontrent une dispersion statistique plus faible et une fiabilité plus élevée par rapport à d'autres méthodologies d'essai. Néanmoins, une dispersion statistique de 25 à 30 % reste inhérente au processus. En outre, la dispersion statistique introduite au cours de la phase d'échantillonnage doit également être prise en compte, en particulier dans le cas des produits alimentaires solides (tels que les produits à base de viande), où les micro-organismes prolifèrent fréquemment.

Par conséquent, les résultats obtenus par l'ajout d'un échantillon de 0,5 g sont statistiquement équivalents à ceux obtenus par l'ajout de 1,5 g (et sont équivalents aux résultats obtenus par toute autre méthode d'essai).

16. Peut-on tester des échantillons à faible densité, comme la farine, selon la procédure standard?

Réponse : Oui, ils peuvent. 17. Pour les échantillons de couleur foncée tels que la sauce de soja, la couleur interfère-t-elle avec l'interprétation des résultats qualitatifs des tests? Vous avez des recommandations ?

Réponse : Si un instrument de détection est utilisé pour l'analyse quantitative, ce problème ne se pose pas. Cependant, si vous effectuez une analyse qualitative uniquement en observant visuellement les changements de couleur :

Pour les échantillons de couleur foncée, si vous craignez que le changement de couleur ne soit pas clairement perceptible à l'œil nu, nous recommandons de diluer l'échantillon avant le test. Vous vous souvenez de la réponse à la question 15 ? Les résultats obtenus en ajoutant 0,5 g ou 1,5 g d'échantillon sont statistiquement équivalents (et comparables aux résultats obtenus par toute autre méthode).

Le même principe s'applique à la dilution.

18. Si vous testez un échantillon d'eau, est-il toujours nécessaire d'ajouter de l'eau stérile? Si oui, combien ?

Réponse: Nous recommandons d'ajouter 1 ml de l'échantillon d'eau et 10 ml d'eau stérile.

19. Différents micro-organismes présentent-ils la même couleur initiale et la même couleur à résultat positif? Veuillez donner des exemples.

Réponse : Non, ils sont différents.

Par exemple, après une incubation d'environ 10 minutes, *Salmonella* présente généralement une couleur initiale de rouge, avec un résultat positif indiqué par le jaune. *Listeria*, en revanche, présente une couleur initiale de bleu, avec un résultat positif indiqué par le jaune. Veuillez vous référer au tableau de référence pour des détails spécifiques.

20. L ' instrument de détection microbienne fonctionne-t-il aussi comme incubateur?

Réponse : Oui. Après avoir bien secoué la bouteille de détection, placer immédiatement dans l'instrument de détection. Une fois que vous avez configuré les paramètres spécifiques des micro-organismes dans le logiciel,

l'instrument effectuera automatiquement le processus d'incubation et générera un rapport d'analyse quantitative.

21. L ' instrument de détection microbienne fonctionne-t-il aussi comme agitateur/oscillateur?

Réponse : Non, ce n’est pas le cas. Vous devez secouer manuellement la bouteille vigoureusement pendant 2 à 3 minutes - ou utiliser un shaker mécanique pendant environ 20 secondes - jusqu'à ce que le contenu soit complètement dissous ou mélangé soigneusement.

22. Quel est le principe sous-jacent à l ' interprétation des résultats par l ' instrument de détection microbienne? Réponse: L'instrument de détection microbienne est un lecteur optique de précision. En utilisant des principes optiques, il détecte avec précision les changements de couleur dans les flacons de détection et génère des rapports d'analyse quantitative précis.

23. L ' instrument de détection microbienne fonctionne-t-il avec une alimentation externe ou dispose-t-il d ' une batterie rechargeable intégrée?

Réponse : Il fonctionne sur une alimentation externe.

24. Combien de bouteilles de détection peut le détecteur microbien analyser simultanément et indépendamment?

Réponse : 8 bouteilles. Il effectue une détection simultanée et indépendante, générant un rapport d'analyse quantitative distinct pour chaque bouteille.

25. Est-il nécessaire d ' installer un logiciel d ' analyse sur un ordinateur pour effectuer une analyse quantitative à l ' aide du détecteur microbien?

Réponse : Oui, vous devez installer le logiciel d'analyse qui l'accompagne.

26. Quels systèmes d ' exploitation informatiques sont compatibles avec ce logiciel d ' analyse?

Réponse : XP, Vista et Windows 7.

27. Si le détecteur est allumé pour la première fois, combien de temps faut-il attendre après avoir connecté l ' alimentation avant de passer à l ' étape suivante?

Réponse : Si vous allumez pour la première fois, il est conseillé d’attendre environ 40 secondes après le démarrage avant de continuer à fonctionner.

28. Lors de l ' analyse quantitative, la bouteille de détection, après avoir été mélangée soigneusement, doit-elle être placée immédiatement dans le détecteur ou attendre un moment avant de l ' insérer?

Réponse: Il doit être placé dans le détecteur immédiatement après un mélange approfondi.

29. Une fois qu ' une bouteille de détection a été placée dans le détecteur, de quelle couleur l ' indicateur correspondant à ce port de détection va-t-il allumer l ' interface du logiciel après avoir cliqué sur < < Démarrer > > dans le logiciel d ' analyse?

Réponse: Après avoir cliqué sur "Démarrer" sur l'interface correspondant à la bouteille de détection spécifique, le feu d'indicateur pour ce port passera de vert à rouge, ce qui indique que le processus de détection a commencé et est actuellement en cours.

30. Lorsque le processus de détection sera terminé, à quelle couleur reviendra l ' indicateur correspondant à ce port de l ' interface du logiciel d ' analyse, indiquant que l ' essai est terminé et qu ' un nouvel échantillon peut être inséré?

Réponse: Pendant que la détection est en cours, l'indicateur reste rouge. Une fois la détection terminée, l'indicateur devient vert. À ce stade, il est autorisé d'insérer une nouvelle bouteille de détection dans le port correspondant du détecteur pour commencer le prochain cycle d'essai. La durée du processus de détection est déterminée soit par la quantité réelle de bactéries présentes (en cas de teneur microbienne élevée) soit par la durée correspondante spécifiée dans le tableau de référence (en cas de teneur microbienne très faible, où la durée de l'essai devrait dépasser le temps nécessaire pour détecter 1 UCF comme indiqué dans le tableau). 31. Quelle est la relation entre le temps d'analyse nécessaire pour une bouteille de détection microbienne et la teneur microbienne dans cette bouteille?

Réponse : C’est une relation inverse. C'est-à-dire que plus la teneur microbienne est élevée, plus le temps de détection correspondant est court; inversement, plus la teneur microbienne est faible, plus le temps de détection correspondant est long.

Si la teneur microbienne dans un échantillon est excessivement élevée, les résultats d'analyse quantitative affichés par le détecteur montreront des fluctuations significatives en quelques minutes ou même quelques secondes.

Si la teneur microbienne est très faible (puisque le RVLM est un instrument très précis et sensible), un utilisateur expérimenté peut, en observant les changements des données sur une période de plusieurs heures (ou même seulement quelques minutes), déterminer préliminairement si la teneur microbienne cible répond aux exigences spécifiées.

32. Avant d ' effectuer une analyse, faudrait-il établir un objectif expérimental clair pour définir la teneur microbienne spécifique à détecter (en particulier, les limites microbiennes admissibles prévues par les normes nationales)?

Réponse : C’est hautement recommandé.

Par exemple, les normes nationales (comme la série GB) et les normes internationales (comme la série CE) spécifient explicitement (ou semi-explicitement) les niveaux maximaux admissibles de présence microbienne dans divers produits de la volaille et du bétail.

Plus précisément, lors de la détection microbienne, la première étape consiste à définir clairement l'objectif de l'analyse. Par exemple, la norme internationale CE 2073:2005 stipule que la teneur maximale admissible en *E. coli* dans la viande fraîche est de 10² UCF/g, ce qui signifie que la teneur en *E. coli* par gramme de viande fraîche ne doit pas dépasser 10² UCF. Dans ce scénario, en consultant le tableau de référence, nous localisons la colonne correspondant à *E. coli* et trouvons la valeur log(10² UCF) = 2. Nous retraçons ensuite cette valeur (2) dans la ligne *E. coli* jusqu'à la première colonne, où nous trouvons le nombre correspondant est 14. Par conséquent, que l'on effectue une analyse qualitative par inspection visuelle ou une analyse quantitative à l'aide du détecteur, on peut obtenir un résultat analytique strictement précis quant à savoir si la teneur en *E. coli* dans l'échantillon dépasse 10² UCF dans un délai maximum de 14 heures. Si une bouteille de détection est utilisée pour l'analyse quantitative, un technicien de laboratoire expérimenté peut, dans un délai très court (par exemple, environ dix à quinze minutes), effectuer une évaluation préliminaire de la teneur microbienne dans la bouteille en fonction des changements dynamiques observés dans les données d'analyse quantitative.

33. Quel est l ' objectif spécifique des tests de teneur microbienne et quel rôle joue le tableau de référence?

Réponse: Il sert de base pour déterminer les paramètres de référence standard - en particulier la température d'incubation, la couleur initiale, la durée de l'analyse et la couleur du résultat positif - correspondant au micro-organisme spécifique à tester. Pour obtenir des instructions détaillées sur son utilisation, veuillez vous référer à la réponse fournie dans la question précédente.

34. Qu ' est-ce qu ' une UCF?

Réponse : CFU signifie « unité formant colonie ».

C'est l'abréviation anglaise pour les unités de grappes microbiennes (colonies) obtenues après la culture.

Il sert d'unité de mesure pour les bactéries (en particulier, celles qui sont visibles) et les champignons. CFU (unité formant colonie) se réfère à une méthode dans laquelle un volume spécifique de suspension microbienne diluée est répandu ou versé sur une plaque d'agar, permettant aux cellules microbiennes individuelles de se disperser à travers la surface. Après l'incubation, chaque cellule viable se développe en une colonie distincte. Contrairement aux méthodes conventionnelles qui utilisent un microscope pour compter les cellules microbiennes individuelles, la méthode CFU mesure principalement la quantité de bactéries *visibles*, c'est-à-dire celles qui forment des colonies dans des conditions standard. Essentiellement, il indique le nombre de cellules microbiennes individuelles présentes par millilitre de suspension. Traditionnellement, ce nombre était simplement appelé "cellules individuelles" ou "comptes". Cependant, nous savons qu'une seule colonie n'est pas nécessairement générée par une seule bactérie; il peut plutôt provenir d'un groupe de bactéries (un agrégat bactérien). Dans de tels cas, se référer à eux simplement comme "cellules individuelles" n'est pas tout à fait exact; la terminologie précise est "unité formant colonie", abrégée "UCF". Elle est analogue aux termes "kilogramme" et "kilo" - ce ne sont que des noms différents pour la même quantité.

CFU signifie "unités formant des colonies". CFU/mL désigne le nombre total de colonies bactériennes contenues par millilitre d'échantillon; l'unité CFU/g est également utilisée, correspondent au milieu de culture solide.

Supposons que je dois tester un échantillon pour déterminer si son nombre de coliformes dépasse 10^6 UCF/g ou 10^6 UCF/ml.

En utilisant l'observation visuelle des changements de couleur à l'intérieur de la bouteille pour une analyse qualitative, veuillez décrire la procédure de détection en détail en faisant référence à la "Température d'incubation et graphique de référence colorimétrique".

Réponse: Étape 1: Ajout d'échantillon

Ajouter l'échantillon à tester (0,1-1,0 g ou 0,1-1,0 ml), puis ajouter 11 ml d'eau stérile. (Selon la nature du matériau d'essai, s'il s'agit d'un liquide, il est recommandé d'ajouter 1 ml d'échantillon et 10 ml d'eau stérile; la différence est négligeable.)

Étape 2: Agiter la bouteille jusqu'à ce que le contenu soit complètement dissous ou mélangé soigneusement.

Si secouer manuellement, secouer vigoureusement pendant environ 2 à 3 minutes; si vous utilisez un shaker mécanique, agiter pendant environ 20 secondes.

Étape 3 : interpréter les résultats du test au moment opportun.

(1) Pour l'analyse qualitative visuelle: Consultez le tableau de référence pour déterminer la température d'incubation spécifique, la couleur initiale, le temps de détection, la couleur du résultat positif et d'autres paramètres correspondent aux coliformes.

Température d'incubation: Selon le tableau de référence, c'est 37°C.

Couleur initiale: Cela se réfère à la couleur qui apparaît après que la bouteille ait été secouée soigneusement et placée dans un incubateur à 37°C pendant environ 10 minutes. Selon le tableau de référence, cette couleur est rouge.

Temps de détection: Notre norme d'essai exige de déterminer si la teneur en coliforme dépasse 10^6 UCF/g ou 10^6 UCF/ml. Selon le tableau de référence, localiser la colonne correspondant au log 10^6 = 6; Trouver la ligne correspondant au nombre 6. Cela indique un temps de détection de 6 heures. Ainsi, le temps d'observation est fixé à 6 heures.

Couleur du résultat positif: Selon le tableau de référence, la couleur indiquant un résultat positif pour les coliformes est jaune. Une fois que les informations nécessaires ont été confirmées, placer le flacon d'essai bien mélangé dans un incubateur à température constante à 37°C et le laisser intact. Après avoir incubé pendant environ 10 minutes, vous remarquerez que le flacon d'essai affiche la couleur initiale correspondant à la détection de coliformes - rouge. Continuer l'incubation; Si la couleur est devenue jaune, cela indique que la teneur en coliformes dans l'échantillon dépasse 10^6 UCF/g ou 10^6 UCF/mL, et l'échantillon est considéré comme non conforme. Si la couleur ne devient pas jaune, mais reste à la couleur rouge initiale ou passe à une teinte intermédiaire, cela indique que la teneur en coliformes dans l'échantillon ne dépasse pas 10 ^ 6 UCF / g ou 10 ^ 6 UCF / ml, et l'échantillon est considéré comme conforme.

(2) Si un détecteur est utilisé pour l'analyse quantitative :

Veuillez vous référer à la question suivante pour cette étape.

Étape 4: stérilisation

Enfin, n'oubliez pas d'appuyer sur le haut du bouchon de la bouteille d'essai pour stériliser la bouteille. Après avoir pressé le bouchon, secouez la bouteille; Il est maintenant sûr de le jeter.

Remarque: Pendant les procédures expérimentales, évitez de toucher le haut même du bouchon de la bouteille d'essai pour éviter la stérilisation accidentelle à un moment inapproprié, ce qui pourrait compromettre les résultats de l'essai.

36. Si la question 34 est exécutée conjointement avec un détecteur pour effectuer une analyse quantitative précise, veuillez fournir une description détaillée des étapes opérationnelles.

Réponse : Si vous utilisez un détecteur pour l’analyse quantitative :

Placez immédiatement la bouteille d'essai bien mélangée dans le détecteur. Lancez le logiciel de détecteur et cliquez sur "Station" pour saisir les informations pertinentes (y compris: nom de l'inspecteur, type de test, ID de l'échantillon, client/source, heure de test, etc.). Dans le menu déroulant "Type d'analyse" de l'interface du logiciel, sélectionnez le type spécifique de micro-organisme à détecter. Cliquez sur "OK", puis cliquez sur "Démarrer"; l'indicateur deviendra rouge, ce qui signifie que le dispositif est entré dans la phase d'analyse. Surveiller les données d'analyse quantitative affichées par le détecteur pour effectuer une détermination.

37. Pourquoi le bouchon de la bouteille de détection ne doit-il pas être abaissé avant la fin de l ' essai?

Réponse: Processus de stérilisation. Le bouchon de la bouteille contient un agent stérilisant; presser le bouchon libère cet agent dans la bouteille, où il réagit avec le solvant interne pour compléter le processus de stérilisation. Par conséquent, s'il vous plaît s'abstenir de toucher le bouchon de la bouteille de détection pendant l'expérience.