Aladdin Ripa lysat (fort) - permanent en stock

Aladdin R301899-100ml RIPALysat (fort)

Aladdin Ripa lysat (fort) - permanent en stock

Numéro d'expédition du produit:R301899-100ml

Nom du produit:RIPALysat (fort)

Spécifications du produit:100 ml

Introduction au produit:

Spécification ou pureté: aucun inhibiteur

Nom anglais:Solution tamponnée de lyse RIPA (forte)

Température de stockage:2-8°Cstocker

Conditions de transport: transport de sac de glace

RIPALe lysat est un lysat rapide traditionnel de tissus ainsi que de cellules, principalement utilisé pour extraire les protéines solubles des tissus animaux et des cellules de mammifères, qui peuvent être utilisées pour lyser les cellules tapissées et les cellules en suspension. Selon la force de son liquide de lyse peut être divisé en trois catégories fortes, moyennes et faibles, les produits correspondants peuvent être sélectionnés en fonction des besoins expérimentaux.RIPALiquide de lyse(Forte) etPeut extraire efficacement le noyau, la membrane cellulaire et les protéines cytoplasmiques, les protéines extraites peuvent être appliquées à la quantification des protéines,Western BlotEt,IPAnalyse de détection égale.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Aladdin Ripa lysat (fort) - permanent en stock

mode d'emploi

(Un) etCellules de culture murale

1.Prenez ce produit à température ambiante pour dissoudre et mélanger, ajouter l'inhibiteur d'enzyme selon les exigences expérimentales.

2.Enlever le liquide de culture des cellules plaquées, avecPBSEt,NSOu sans nettoyage de liquide de culture de sérum1Une fois, centrifuger à basse vitesse, jeter le blanc et laisser le précipité.

3.selon 6 Plaque ajoutez par trou150à250 μlLa proportion de lysat contenant l'Inhibiteur enzymatique est ajoutée au produit. La pipette souffle doucement pour permettre au lysat et aux cellules d'entrer pleinement en contact. Placé sur la glace ou4℃Lyse, généralement lysat agit sur les cellules 1à3sA l'intérieur, les cellules sont lysées. généralement 6 Plaque de puits par puits ajout de cellules150 μlLe lysat est suffisant, mais si la densité cellulaire est très élevée, il peut être approprié d'augmenter la quantité de lysat à 200à250 μl- Oui.

4.10000à12000g,4℃Centrifugation 5à10 minutes(Sans centrifugeuse cryogénique, la centrifugation à température ambiante est également possible) etPrenez le nettoyage.

5.UltérieureSDS-PAGEEt,Occidental, des opérations telles que l'immunoprécipitation et l'immunocoprécipitation.

(deux) etCellules cultivées en suspension

1.Après avoir pris ce mélange de dissolution à température ambiante, ajouter l'Inhibiteur enzymatique.

2.Centrifuger les cellules en suspension à basse vitesse, abandonner le surnageant et recueillir le précipité.

3.Appuyez légèrement sur les cellules avec vos doigts pour les rendre lâches. selon 6 Plaque de puits par puits ajout de cellules150à250 μlLa proportion de lysat contenant l'Inhibiteur enzymatique est ajoutée au produit. généralement 6 Plaque de puits par puits ajout de cellules150 μlLe lysat est suffisant, mais si la densité cellulaire est très élevée, il peut être approprié d'augmenter la quantité de lysat à 200à250 μl.encore une fois, faites glisser vos doigts pour lyser suffisamment les cellules, après la lyse adéquate, il ne doit pas y avoir de précipitation cellulaire évidente.

4.10000à12000g,4℃Centrifugation5à10 minutes(Sans centrifugeuse cryogénique, la centrifugation à température ambiante est également possible) etPrenez le nettoyage.

5.Effectuer un suiviSDS-PAGEEt,Occidental, des opérations telles que l'immunoprécipitation et l'immunocoprécipitation.

(trois) etéchantillon d'organisation

1.Après avoir pris ce produit à température ambiante pour dissoudre le mélange, l'Inhibiteur enzymatique est ajouté.

2.Mettez le GroupezhiCouper en petits morceaux, le plus petit est le mieux.

3.Prendre congelé à l'azote liquide ou au réfrigérateur à très basse température30 minutesLes tissus ci - dessus, rapidement broyés avec de l'azote liquide, le processus de broyage est contrôlé au maximum dans1à2 minutesPour réduire la dégradation des protéines.

4.Selon chaque20 mgOrganisations adhérer 150à250 μlProportion de lysat, on ajoute le lysat contenant l'Inhibiteur enzymatique. Sur glace ou4℃Craquage 15à30 minutes- Oui.

5.étape 3、4 Il est également possible de procéder comme suit: selon chaque20 mgOrganisations adhérer 150à250 μlLa proportion de lysat est ajoutée au produit contenant l'Inhibiteur enzymatique. Homogénateur avec un homogénateur en verre ou un broyeur de tissus jusqu'à ce qu'il soit suffisamment clivé, le processus est contrôlé autant que possible dans 1à2 minutesPour réduire la dégradation des protéines.

6.10000à12000g,4℃Centrifugation 5à10 minutes(Sans centrifugeuse cryogénique, la centrifugation à température ambiante est également possible) etPrenez le nettoyage.

7.Effectuer un suiviPAGEEt,Occidental, des opérations telles que l'immunoprécipitation et l'immunocoprécipitation.

Précautions

1.Après l'élimination du liquide de culture des cellules plaquées, si les protéines dans le sérum ne sont pas perturbées, il peut être fait sans nettoyage.

2.La quantité de lysat utilisée peut être augmentée de manière appropriée si le lysat n'est pas suffisamment clivé et réduite de manière appropriée si un échantillon de protéines à forte concentration est nécessaire.

3.Si la quantité de cellules est plus importante, il est nécessaire de 50à100 Millions de cellules/Centrifuger le tube, puis le craquer à nouveau. De grandes masses de cellules sont plus difficiles à lyser suffisamment, tandis que de petites quantités de cellules sont relativement faciles à lyser suffisamment en raison de la Facilité du lysat et du contact suffisant avec les cellules.

4.Si l'échantillon de tissu lui - même est très mince, il peut être craqué par addition directe de lysat après un cisaillement approprié, parVorte×Laisser l'échantillon craquer suffisamment. Le surnageant est ensuite également centrifugé pour des expériences ultérieures. Le craquage direct présente l'avantage d'être relativement commode et de ne pas avoir à utiliser d'homogénateur, l'inconvénient étant qu'il n'est pas suffisamment craqué comme avec un homogénateur.

5.Dans des conditions de basse température, il peut y avoir un phénomène de turbidité, peut37℃Le bain d'eau favorise sa dissolution et n'affecte pas l'effet de l'utilisation; Le temps de dissolution n'est pas facilement trop long et évite l'échec des ingrédients efficaces.

6.Un petit morceau de gomme transparente apparaît souvent dans les produits de lyse, phénomène normal. Cette gomme transparente contient le génomeADNComplexe de etc. En non - détection et GénomiqueADNDans le cas de la fixation de protéines particulièrement serrées, le surnageant peut être directement centrifugé pour des expériences ultérieures; S'il est nécessaire de détecter et de lier génomiquement une protéine particulièrement serrée, il est possible de disperser cette gomme hyaluronique par fragmentation par Sonication, suivie d'une centrifugation pour le débridement en vue d'expériences ultérieures.

7.L'étape opératoire de la lyse cellulaire, qui doit être placée sur la glace ou4℃Effectué.

Champ d'application

Convient à la recherche biologique et médicale générale

Informations sur la commande de produits:

R301899-100ml RIPALysat (fort) 100 ml