Blood RNA DNA extraction en petites quantités Kit Extraction

Blood RNA DNA Small Extract Kit série Extract

La composition du kit comprend une solution protectrice d'ARN et d'ADN sanguin (Buffer BR1, Cat. Rp601) qui facilite la collecte fractionnée, le transport et la conservation des échantillons.

Après mélange de l'échantillon de sang avec buffer BR1 dans un rapport de 1: 2,5 pendant 2 heures à température ambiante, l'ADN et l'ARN de l'échantillon sont solidifiés en agglutinats pulvérulents qui peuvent facilement être précipités par centrifugation.

Colonne d'adsorption d'ADN - RD adsorbe sélectivement l'ADN en retenant l'ARN dans le filtrat. Après ajustement des conditions de fixation par ajout d'éthanol au filtrat, la colonne d'adsorption d'ARN - a adsorbe efficacement les ARN macromoléculaires (y compris les ARNm et les arnr, à l'exclusion des ARNt et des petits ARN dégradés en 5S).

Après lavage respectif des colonnes d'adsorption d'ADN - RD et d'ARN - a, l'ADN et l'ARN sont élués séparément à l'aide d'eau désionisée ou d'une solution peu saline qui peut être utilisée directement dans des expériences ultérieures.

Ce kit convient pour l'extraction séparée de l'ADN et de l'ARN à partir de ≤ 1 ml de sang total frais humain ou mammifère, ≤ 3 ml de sang total humain ou mammifère congelé, le sang approprié pour le traitement étant l'anticoagulant EDTA - K2 et le sang inapproprié pour le traitement de l'héparine ou de l'anticoagulant à l'acide citrique.

Production et application d'ARN: 3 - 8 μg d'ARN / ml de sang frais, 1 - 2 μg d'ARN / ml de sang congelé; Petit volume d'élution 15 µl. La plupart des ARNt et des petits ARN dégradés en 5S ont été éliminés et peuvent être utilisés directement pour 5 ` race et 3 ` race.

Production d'ADN et application: 5 - 10 μg d'ADN / ml de sang; Petit volume d'élution 50 µl. La pureté est inférieure à celle des kits de la série Blood Genome DNA Extract et peut être utilisée pour le découpage enzymatique et la PCR conventionnelle.

Ce kit est également adapté pour extraire l'ARN viral et l'ADN des matières fécales animales et du contenu intestinal des mollusques.
La solution saline physiologique disperse l'échantillon et centrifuge le surnageant avec de l'ARN viral et de l'ADN. Après avoir été mélangé avec buffer BR1 dans un rapport de 1: 2,5 pendant 2 heures à température ambiante, l'ADN et l'ARN de l'échantillon sont solidifiés en agglutinats pulvérulents qui peuvent facilement être précipités par centrifugation, ce qui élimine la grande majorité des composants inhibiteurs de PCR. Les opérations ultérieures sont les mêmes que pour le traitement des échantillons de sang.

ARN extrait de 0,4 ml de sang total frais

Volume d'élution 25 µl, volume d'électrophorèse 2 µl, 1 x Tae, Agarose 2%, 6,7 V / CM 15 min

L'ARN obtenu à partir de sang frais est exempt d'ADN génomique apparent et d'ARN 5S.

Dans le gel d'agarose non dénaturé, l'ARN 28S, l'ARN 18s et l'ARN 5S ont des mobilités d'ADN similaires à 2000 pb, 750 pb et 100 pb, respectivement.

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