Contrôles positifs pour tests de Cytotoxicité in vitro

CorpsTest de Cytotoxicité externe contrôle positifparInstitut de recherche Hatano (HRI)Recherche production，Largement utilisé dans les expériences de Cytotoxicité in vitro, peut répondre à la pharmacopée chinoise-Méthodes d'examen de la Cytotoxicité,la norme ISO 10993etYBB 00012003Exigences relatives aux paramètres de la méthode d'examen de la Cytotoxicité.

Contrôles positifs pour tests de Cytotoxicité in vitroLe baptême est effectué à l'aide d'un milieu de culture conventionnel. La méthode de lixiviation est la suivante: Opération stérile, prendre1 grammeContrôles positifs pour tests de Cytotoxicité in vitroPlacé en15 mlDans un tube de centrifugation stérile, conformément à3 ml / gLa proportion de baptême est ajoutée au milieu de culture du milieu de baptême, les oscillations sont placées horizontalement,120 tours par minute，37Immersion dans les conditions de ℃24 heures. Mélanger de haut en bas après la fin du baptême10Une fois, prenez le lixiviat pour l'essai. Le milieu de culture utilisé pour la lixiviation sert de témoin à blanc. Attention aux milieux bien formulés en4Ne pas stocker plus de deux semaines dans des conditions de ℃. Essai de Cytotoxicité in vitro adoptionMTTMéthode de détection: prendre en bon étatL929Cellules, centrifugation digestive, formulé en suspension cellulaire, inoculé dans96Plaque de culture de puits. Mise en place de plusieurs pores par groupe, inoculation par trou100µLSuspension cellulaire, position37℃、5%Du CO2CO2Incubation en incubateur24 heures. jeter le milieu original et ajouter100µLLiquide de lixiviation, liquide témoin vierge, enCO2L'incubateur continue la culture.24 heuresAprès cela, la morphologie cellulaire est observée au microscope. Vider le liquide à l'intérieur des trous, ajouter par trou50µL1mg/mLDe stérilitéMTTLa solution (MTTutiliserMEMConfiguration du milieu de culture, maintenant avec la formulation actuelle, pas de milieu de culture disponible), continuer la culture2hAprès avoir vidé le liquide à l'intérieur du trou, ajouter100µLIsopropanol, mélange oscillant, dans570 nmet650nmL'Absorbance est déterminée à la longueur d'onde, la survie cellulaire est calculée.

Les essais de Cytotoxicité, qui utilisent des méthodes de culture cellulaire in vitro pour évaluer la Cytotoxicité potentielle des Biomatériaux et des dispositifs médicaux ou des solutions de lixiviation, sont l'un des principaux indicateurs de détermination dans le système d'évaluation biologique des Biomatériaux et sont des éléments sur lesquels les dispositifs médicaux et les Biomatériaux pour presque toutes sortes d'utilisations doivent être testés. Les tests de Cytotoxicité testent les effets du matériel biologique sur la fonction métabolique des cellules à court terme et permettent de déterminer rapidement si le matériel est potentiellement cytotoxique.

Les tests de Cytotoxicité comme moyen de détecter la toxicité des matériaux biologiques, ont les avantages de la simplicité, de la sensibilité élevée, du faible coût et de la courte période d'essai, sont largement utilisés dans la détection et l'évaluation de la biocompatibilité des matériaux biologiques et des produits de dispositifs médicaux. Les méthodes d'évaluation de la Cytotoxicité du matériel biologique vont de l'observation des changements morphologiques et quantitatifs des cellules à l'évaluation de l'adhérence, de la prolifération, du métabolisme, etc., avec le nombre de cellules viables et la capacité de prolifération cellulaire comme méthode d'évaluation de la biocompatibilité des cellules du matériel biologique. Les tests spécifiques sont le test d'absorption de rouge neutre, le test de formation de clone,MTTTests de Cytotoxicité etXTTMéthodes telles que les essais de Cytotoxicité, dans lesquellesMTTetXTTLes méthodes d'essai de Cytotoxicité sont plus acceptables et plus largement utilisées car elles permettent de déterminer quantitativement la Cytotoxicité des matériaux.

MTTetXTTTest de Cytotoxicité principe de détection de succinate déshydrogénase dans les mitochondries de cellules vivantes rend exogèneMTTRéduit à une forme cristalline bleu - violet insoluble dans l'eau 臢(Formazan)Et déposé dans les cellules, les cellules mortes n'ont pas cette fonction. Diméthylsulfoxyde(DMSO)Ou Isopropanol ou phénazine sulfate de méthyle(PMS)Peut dissoudre la cristallisation de méthyl 臢 dans les cellules, en utilisant un étalon enzymatique dans570 nmSa valeur d'absorption lumineuse est déterminée à la longueur d'onde et, dans une certaine plage de nombres cellulaires, la quantité de cristallisation formée est directement proportionnelle au nombre de cellules. Selon les valeurs d'Absorbance mesurées(OD)Valeur) etJuger le nombre de cellules vivantes,ODPlus la valeur est grande, plus la cellule est active et moins elle est toxique. En calculant le taux de prolifération des cellules, il est possible d'évaluer quantitativement la Cytotoxicité des matériaux médicaux et de leurs produits. On peut également calculer la viabilité des cellules en cas de dilution à différentes concentrations du lixiviatIC50(Inhibition de l'activité cellulaire50% de concentration) et, évaluer la Cytotoxicité des matériaux biologiques et de leurs produits.

Contrôles positifs pour tests de Cytotoxicité in vitroCaractéristiques avec une bonne reproductibilité des lots, une performance stable, une taille de spécification riche, peut être évalué comme un dispositif médical biologique-Matériau idéal pour la détermination de la Cytotoxicité.