Colonne d'immunoaffinité aflatoxine M1

Instructions d'utilisation colonne d'immunoaffinité M1 Aflatoxines totales

[Résumé]

Aflatoxine, un métabolite secondaire produit par des champignons tels que aflatoxine, Aspergillus parasiticus et d'autres, est classé comme cancérogène de classe 1 par le Centre de recherche sur le cancer de l'Organisation mondiale de la santé, tout en étant une substance toxique * hautement toxique qui est largement présente dans divers aliments. Le maïs, les arachides, le riz, le blé et d'autres céréales et leurs sous - produits sont la principale source d'Aflatoxines, tandis que l'aflatoxine B1 dans les aliments pour animaux est métabolisée par les animaux et produit de l'aflatoxine M1, qui est encore très toxique et cancérogène, est également largement présente dans le lait, le sang, les tissus et autres aliments. L'aflatoxine, l'un des trois principaux déclencheurs du cancer du foie et la principale cause de maladies telles que le cancer de l'estomac, le cancer de l'intestin et d'autres, constitue une grande menace pour la santé humaine. Les pays du monde entier ont des normes strictes * sur les Aflatoxines dans les aliments et les aliments pour animaux. La détection de l'aflatoxine M1 dans le lait et les produits laitiers est spécifiée dans la norme nationale de sécurité des produits laitiers entrée en vigueur le 1er juin 2010, la principale méthode de traitement avant échantillon utilisée est la méthode de purification par colonne d'immunoaffinité.

[champ d'application et performance]

La gamme de colonnes immunologiques mycotoxines de la société est une colonne d'immunoaffinité haute performance conçue pour nettoyer (purifier) ou concentrer les échantillons avant de procéder à une HPLC (chromatographie liquide à haute performance), GC - MS (chromatographie en phase gazeuse - coupleur de spectrométrie de masse), Elisa (dosage immunoadsorbant enzymatique).

Il est utilisé pour la détection qualitative et quantitative de l'aflatoxine M1 dans le lait, la poudre de lait, le lait fermenté, le fromage, la crème et d'autres échantillons, ainsi que pour le traitement pré - échantillon.

Capacité de colonne: ≥100ng

Récupération: ≥ 90%

[principe d'essai]

La base du dosage de ce produit est la réaction antigénique - anticorps, l'anticorps monoclonal aflatoxine M1 est fixé sur un gel intracolonne, l'aflatoxine M1 de l'échantillon est extraite, filtrée, diluée, puis l'extrait de l'échantillon est lentement passé à travers la colonne de chromatographie d'immunoaffinité aflatoxine M1, à l'intérieur de laquelle La toxine est liée à l'anticorps, après quoi la colonne d'immunoaffinité lavée élimine les autres substances qui ne sont pas liées. L'aflatoxine M1 est éluée au méthanol puis injectée dans un instrument d'analyse pour détection.

[Composition de l'emballage]

Aflatoxine M1 standard (en option)

25 PCS / boîte, 3ml tube de colonne / branche

Description du produit 1 exemplaire

[matériel et réactifs nécessaires et non fournis]

Équipement:

Homogénéisateur à grande vitesse ou homogénateur de tissus

Broyeur de …

Cylindre doseur de 200 ml / 50 ml

Balance: sensations 0,1 g

Compteur d'acidité …

L'entonnoir à fractionnement neneneea

Micropipettes: 100ml ~ 1000ml en une seule passe

Papier filtre rainuré (papier filtre qualitatif ou quantitatif rapide plié)

Entonnoir de 50 ml

Neneneeaévaporateur rotatif

Tube à essai en verre à usage unique

Rack de fonctionnement de flux de pompe (y compris les pompes à air, injecteurs en verre de différents volumes, etc.)

Gobelets, bouteilles jaugées, bouteilles coniques, etc.

Réactifs:

Méthanol (grade chromatographique)

Acétonitrile (grade chromatographique)

Éther de pétrole

Eau distillée ou désionisée

Solution (0,5 mol / l) peser 2 G * dissous dans 100 ml d'eau

[Étapes de traitement des échantillons]

I) lait

- chauffer un bain - Marie de 100 ml de lait à 40 oc;

Neneneem4000r / min centrifuger 15min, recueillir 50ml de liquide limpide à utiliser

Ii) préparations lactées et en poudre pour nourrissons et enfants en bas âge

Peser un échantillon de 10 g de lait en poudre, ajouter 100 ml d'eau à 50 oc plusieurs fois en petites quantités, remuer pour que la poudre de lait se dissolve suffisamment

Neneneem6000r / min centrifuger 15min, recueillir 50ml de liquide limpide à utiliser

Peser un échantillon de 60 g mélangé et abaisser le pH à 7,4 avec une solution * de 0,5 mol / l indiquée par l'acidimètre;

Neneneemdire à l'homogénat 5 min à 9500 tr / min avec un homogénéisateur haute vitesse

Le bain d'eau est chauffé à 40 oc;

Neneneem4000r / min centrifuger 15min, recueillir 50ml de liquide limpide à utiliser

(IV) fromage

- peser 5 g d'un échantillon d'essai mélangé à un tamis à mailles perméables finement coupées dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 2 ml d'eau et 30 ml de méthanol;

- dire à l'homogénat à 9500 tr / min pendant 5 min avec un homogénéisateur à grande vitesse;

Extraction par ultrasons pendant 30 min;

- centrifuger 15 min à 6000 tr / min, recueillir le surnageant et le transférer dans une ampoule à décanter de 250 ml.

- ajouter 30 ml d'éther de pétrole (4.3) dans l'ampoule à décanter et agiter pendant 2 min;

Après la stratification, décaler la couche inférieure dans un bécher de 50 ML et éliminer la couche d'éther de pétrole.

L'extraction avec de l'éther de pétrole est répétée 2 fois;.

La solution de la couche inférieure est transférée dans un ballon de 100 ml et concentrée sous pression réduite jusqu'à environ 2 ml; le concentré est versé dans un tube à centrifuger et le ballon est lavé en 2 fois avec une solution aqueuse d'acétonitrile (1 + 4) de 5 ML, le liquide de lavage étant versé ensemble Dans un tube à centrifuger de 50 ml;

Neneneemdiluer avec de l'eau jusqu'à environ 50 ml, centrifuger 5 min à 6000 tr / min, surnageant pour le traitement de purification.

(v) crème

Peser un échantillon de 5 g dans un bécher de 50 ml;

Neneneemdissoudre avec 20 ml d'éther de pétrole et transférer dans un flacon conique à bouchon de 250 ml.

- ajouter 20 ml d'eau et 30 ml de méthanol et, après 30 min d'agitation, transférer tout le liquide dans l'ampoule à décanter;

Après la stratification, le tout est transféré dans un ballon de 100 ml, concentré à environ 5 ml sous pression réduite dans un évaporateur rotatif et dilué à environ 50 ml avec de l'eau pour le traitement de purification.

[étape de purification de la colonne d'affinité]

La colonne d'immunoaffinité est fixée sous une seringue en verre de 50,0 ML. Prélever avec précision 50,0 ml de liquide limpide dans la seringue en verre;

- connecter la pompe à pression d'air avec la seringue en verre, ajuster la pression de sorte que la solution traverse lentement la colonne d'immunoaffinité avec un débit d'environ 2 - 3 ml / min jusqu'à ce que 2 ~ 3 ml d'air traverse le corps de la colonne;

La seringue en verre de 10 ml est reliée à la colonne d'affinité, 10 ml d'eau sont ajoutés à la seringue et la pression ajustée est telle que l'eau lave la colonne d'affinité à un débit d'environ 6 ml / min.

Ajouter exactement 4 ml d'élution d'acétonitrile de grade chromatographique avec un débit de 1 ml / min ~ 2 ml / min, recueillir tout l'éluant dans un tube à essai en verre pour la détection.

[décision de résultat]

Après purification par colonne d'immunoaffinité, l'éluant acétonitrile recueilli peut être détecté directement par fluorimètre ou HPLC, ou encore par chromatographie sur couche mince ou par Kit immunoenzymatique. La teneur en aflatoxine M1 dans les 4 ml D'éluant recueillis correspond à la teneur en aflatoxine M1 d'un échantillon de 50 ml de lait, d'un échantillon de lait fermenté ou de 5 g de lait en poudre, d'un échantillon de fromage et d'un échantillon de crème.

Si d'autres solvants sont nécessaires pour la détection par HPLC, l'éluant acétonitrile à l'azote peut être séché par soufflage puis remis en solution.

[précautions]

Les neneneemaflatoxines sont extrêmement dangereuses et doivent être manipulées avec des gants.

Les récipients en verre usagés et les solutions d'Aflatoxines sont de préférence trempés pendant une nuit avec une solution d'hypochlorite de sodium à 5%.

Neneneemn'utilisez pas de colonne d'immunoaffinité avec une date de péremption.

[conditions de stockage et durée de conservation]

Conditions de stockage: colonne d'affinité 2 - 8 ℃ conservée, ne peut pas être congelée.

Conservation: le produit est valable 12 mois.