Facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) ELISA Kit

Facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) ELISA Kit

Conditions de conservation et durée de validité

1. Kit de conservation: 2 - 8 ℃.

2. Validité: 6 mois

Principes expérimentaux

Ce kit utilise la méthode sandwich à double anticorps pour déterminer les niveaux de facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) dans les spécimens. Les microplaques sont emballées avec des anticorps purifiés de facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) pour former des anticorps en phase solide, qui sont ajoutés successivement au facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF) dans les microplaques encapsulées dans le monomab, puis combinés avec des anticorps de facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF) marqués HRP pour former un complexe anticorps - marqueur anti - soma - antigène - enzyme qui est coloré par le substrat TMB après un lavage cher - fond. Le TMB est converti en bleu sous la catalyse de l'enzyme HRP et en jaune final sous l'action de l'acide. La nuance de couleur et le facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF) dans les échantillons étaient positivement corrélés. L'Absorbance (valeur OD) a été déterminée à l'aide d'un étalon enzymatique à une longueur d'onde de 450 nm et la concentration du facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) dans l'échantillon a été calculée à l'aide d'une courbe standard.

Composition du kit

1Liquide de lavage concentré 30X20ml × 1 bouteille7Liquide de terminaison6 ml × 1 flacon

2Réactifs d'étalonnage enzymatique6 ml × 1 flacon8Standard (320 ng / l)0,5 ml × 1 flacon

3Plaque de marquage enzymatique12 trous × 8 bandes9Dilution standard1,5 ml × 1 flacon

4Dilution de l'échantillon6 ml × 1 flacon10Mode d'emploi1 exemplaire

5Agent de rendu des couleurs a liquide6 ml × 1 flacon11Film de scellement2 feuilles

6Agent de rendu des couleurs B liquide6 ml × 1 / bouteille12Sac scellé1 pour

étapes de fonctionnement

1.Dilution des étalons: Ce kit fournit un étalon primitif, que l'utilisateur peut diluer dans de petits tubes en suivant le schéma ci - dessous.

160 ng/LStandard n°5150 µl d'étalon brut sont ajoutés à 150 µl de dilution d'étalon

80 ng/LStandard n°4150 µl d'étalon n°5 sont ajoutés à 150 µl de dilution d'étalon

40 ng/LStandard n°3150 µl d'étalon n°4 sont ajoutés à 150 µl de dilution d'étalon

20 ng/LStandard n°2150 µl d'étalon n°3 sont ajoutés à 150 µl de dilution d'étalon

10 ng/LStandard n°1150 µl d'étalon n°2 sont ajoutés à 150 µl de dilution d'étalon

2.Échantillonnage: Placez des trous blancs séparément (les trous de contrôle blancs n'ajoutent pas d'échantillon et de réactif étalon enzymatique, les étapes restantes fonctionnent de la même manière), des trous standard, des trous d'échantillon à tester. Dans le paquet d'étalon d'enzyme est dosé avec précision 50 μl de l'étalon sur la plaque, dans le puits de l'échantillon à tester est d'abord ajouté 40 μl de dilution de l'échantillon, puis 10 μl de l'échantillon à tester (la dilution finale de l'échantillon est de 5 fois). Ajouter l'échantillon au fond du trou de la plaque de marquage enzymatique, essayez de ne pas toucher la paroi du trou, agitez doucement et mélangez.

3.Incubation: incuber à 37 ° C pendant 30 minutes après avoir scellé les plaques avec un film de scellement.

4.Dosage: laisser le liquide de lavage concentré 30X après dilution avec de l'eau distillée 30X

5.Lavage: Retirez soigneusement le film de la plaque d'étanchéité, jetez le liquide, égouttez, remplissez chaque trou avec du liquide de lavage, laissez reposer 30 secondes après l'égouttage, répétez ainsi 5 fois, tapotez à sec.

6.Ajout d'enzymes: 50 µl de réactif étalon enzymatique sont ajoutés par puits, à l'exception des puits vierges.

7.Incubation: même opération 3.

8.Lavage: même opération 5.

9.Rendu des couleurs: chaque puits d'abord ajouter l'agent de rendu des couleurs A50 μl, puis ajouter l'agent de rendu des couleurs B50 μl, mélanger légèrement sous agitation, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 10 minutes.

10.Terminaison: ajouter 50 µl de liquide de terminaison par puits pour terminer la réaction (à ce moment - là, le bleu tourne au jaune).

11.Détermination: l'Absorbance (valeur OD) de chaque pore est mesurée séquentiellement à la longueur d'onde de 450 nm et à zéro dans les pores blancs. Le dosage doit être effectué dans les 15 minutes suivant l'addition du liquide de terminaison.

calcul

Avec la concentration de l'étalon en abscisse et la valeur od en ordonnée, une courbe standard est tracée sur le papier de coordonnées, la concentration correspondante est détectée par la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon; Multiplier par le multiple de dilution; Ou calculer l'équation de régression linéaire de la courbe standard avec la concentration de l'étalon et la valeur OD, remplacer la valeur od de l'échantillon dans l'équation, calculer la concentration de l'échantillon et multiplier par le multiple de dilution, c'est - à - dire la concentration réelle de l'échantillon.

Précautions

1. Le kit doit être retiré de l'environnement réfrigéré et peut être utilisé après 15 - 30 minutes d'équilibre de la température ambiante, si le paquet d'enzyme standard n'est pas utilisé après l'ouverture de la plaque, les lattes doivent être emballées dans un sac scellé pour la conservation.

2. Le liquide de lavage concentré peut avoir un dégagement cristallin, dilué peut être chauffé dans un bain - Marie pour aider à la dissolution, le lavage n'affecte pas le résultat.

3. L'éprouvette doit être utilisée pour chaque étape d'échantillonnage et sa précision doit être fréquemment corrigée pour éviter les erreurs d'essai. Le temps d'un prélèvement est mieux contrôlé dans les 5 minutes, si le nombre de spécimens est élevé, un prélèvement au pistolet est recommandé.

4. S'il vous plaît faire la courbe standard en même temps que chaque détermination, il est préférable de faire des pores. Si le contenu de la substance à mesurer dans l'échantillon est trop élevé (la valeur de do de l'échantillon est supérieure à la valeur de do du premier puits du puits standard), diluez d'abord un certain multiple (n fois) avec la dilution de l'échantillon avant de le déterminer et, pour le calcul, multipliez Enfin par le multiple de dilution total (× n × 5).

5. Le film de scellement est limité à un usage unique pour éviter la contamination croisée.

6. Substrat s'il vous plaît garder à l'abri de la lumière.

7. Strictement selon le fonctionnement des instructions, le résultat de l'essai doit être déterminé par la lecture de l'étalon enzymatique.

8. Tous les échantillons, les liquides de lavage et tous les types de déchets doivent être éliminés selon les matières infectieuses.

9.Facteur de croissance dérivé des plaquettes bovines (PDGF) ELISA KitLes différents composants du numéro de lot ne doivent pas être mélangés.