Kit de détection ELISA pour les anticorps enzymatiques liés au virus Geta

Kits de détection d'anticorps enzymatiques liés au virus Geta

Mode d'emploi

Principe de détection

Ce kit se compose d'un marqueur enzymatique pré - emballé avec l'antigène du virus GETA, d'un marqueur enzymatique et d'autres réactifs complémentaires, dans lequel le sérum témoin et l'échantillon à examiner sont ajoutés au moment de l'expérience, après incubation si l'échantillon contient des anticorps contre le virus GETA, il sera lié à l'antigène sur le marqueur enzymatique, après lavage pour éliminer les autres composants non liés; Rajouter le marqueur enzymatique, liaison spécifique au complexe antigène - anticorps sur la plaque enzymatique; Le marqueur enzymatique non lié est à nouveau éliminé par lavage, un liquide de substrat TMB est ajouté dans les puits et réagit avec le marqueur enzymatique pour former un produit bleu, la profondeur de rendu des couleurs étant positivement corrélée à la teneur en anticorps spécifiques de l'échantillon; Après la fin de la réaction par addition du liquide de terminaison, le produit devient jaune; La détermination des valeurs d'absorption lumineuse dans chaque puits réactionnel à l'aide d'un étalon enzymatique à une longueur d'onde de 450 nm permet de savoir si l'échantillon contient des anticorps contre le virus GETA.

Composition du kit

Stockage et date d'expiration

2 ~ 8 ℃ conservation, 12 mois de validité.

Après l'ouverture du paquet par la plaque, s'il vous plaît garder à l'abri de la lumière à 2 ~ 8 ℃, éviter l'humidité. La durée d'utilisation est de 2 mois.

Instruments applicables

Jauge enzymatique contenant une longueur d'onde de 450 nm, appareil thermostatique à 37 ℃, micropipette réglable.

Préparation des échantillons

1. Prenez le sang total de l'animal pour préparer le sérum selon la méthode conventionnelle, exigez que le sérum soit clair, pas d'hémolyse, pas de contamination. L'échantillon peut être conservé à 2 ~ 8 ℃ en 1 semaine, à long terme - 20 ℃ conservation.

Le liquide de lavage concentré doit être ramené à la température ambiante avant utilisation pour dissoudre le précipité, puis dilué 20 fois avec de l'eau distillée ou désionisée dans le liquide de lavage de travail (par exemple, 19 parties d'eau distillée ou désionisée plus 1 partie de liquide de lavage concentré).

Méthode d'inspection

1. Laissez le kit à température ambiante pendant 30 minutes avant utilisation et revenez à la température ambiante.

2. Prenez la quantité requise de lamelles d'enzyme, faites un contrôle négatif et positif de 1 puits chacun, les lamelles inutilisées sont scellées dès que possible, 2 ~ 8 ℃ pour la conservation.

3. Le trou d'échantillon ajoute d'abord 5µl de l'échantillon à examiner, puis 95µl de la dilution de l'échantillon, bien osciller et mélanger.

4. Négatif, positif contrôle puits ajouter négatif, positif contrôle 100 μl, respectivement.

5. Mélanger, couvrir la membrane de la plaque de couverture, mettre 37 ℃ incuber pendant 30 minutes.

6. Jeter le liquide à l'intérieur du trou, ajouter 250µl de liquide de lavage de travail par trou, laver avec un mélange à la commotion pendant 60 secondes après l'abandon, répéter le lavage 5 fois, * Le liquide sec une fois.

7. Ajouter 100 μl de marqueur enzymatique par puits, mettre 37 ℃ à l'abri de la lumière pendant 30 minutes.

8. Jeter le liquide à l'intérieur du trou, ajouter 250µl de liquide de lavage de travail par trou, laver avec un mélange à la commotion pendant 60 secondes après l'abandon, répéter le lavage 5 fois, * Le liquide sec une fois.

9. Mélanger le liquide chromogène a et le liquide chromogène B dans des proportions égales en volume en tant que liquide de travail de substrat en fonction du nombre d'échantillons, maintenant utilisé. Chaque puits plus 100µl, mettre 37 ℃ réaction d'évitement de la lumière pendant 10 minutes, s'il y a une vitesse de rendu de couleur globale trop rapide, peut terminer le rendu de couleur 5 minutes plus tôt, le temps de rendu de couleur * n'est pas plus de 15 minutes.

10. Chaque puits plus 100 μl de liquide de terminaison, mélangé, à 450 nm pour déterminer la valeur d'absorption optique (valeur OD) de chaque puits.

Valeur de référence

Dans des conditions expérimentales normales, contrôle positif od - contrôle négatif od > 0,2.

Interprétation des résultats de l'inspection

1. S / p = (échantillon od - contrôle négatif OD) / (contrôle positif od - contrôle négatif OD).

2. Le résultat est jugé positif avec S / P ≥ 0,4.

3. Résultats à & lt; S / P & gt; 0,2 & lt; 0,4 tenir compte de la possibilité d'une insuffisance de la puissance des anticorps ou d'une infection suspectée.

4. Les résultats ont été jugés négatifs lorsque S / P & lt; 0,2.

Limites de la méthode d'essai

1. Ce kit sert uniquement d'évaluation approximative des anticorps contre le virus Gaeta dans les échantillons de détection qualitative.

2. Ce kit est pour l'usage expérimental seulement et ne doit pas être utilisé dans des expériences cliniques ou des expériences humaines.

Précautions

1. Les opérations expérimentales doivent porter des gants et des vêtements de travail, être strictement saines et mettre en œuvre le système d'isolement de désinfection, toutes sortes de déchets expérimentaux doivent être éliminés selon les matières infectieuses.

2. Le liquide de terminaison est corrosif et devrait éviter le contact avec la peau et les vêtements, tels que le contact par inadvertance s'il vous plaît rincer immédiatement avec beaucoup d'eau du robinet.

3. La plaque de marquage enzymatique doit être ramenée à la température ambiante lorsqu'elle est retirée de l'environnement réfrigéré pour ouvrir le sac, la plaque de marquage enzymatique non utilisée doit être placée dans un sac scellé avec un dessicant pour la conservation.

4. Le liquide de lavage concentré cristallise facilement à basse température et doit être ramené à la température ambiante pour se dissoudre lorsqu'il est utilisé.

5. Les échantillons utilisés pour la détection doivent rester frais.

6. La détermination du résultat de l'essai doit être subordonnée à la lecture de l'étalon enzymatique.

7. Les différents composants de réactif de numéro de lot ne doivent pas être mélangés.