H1975 cellules humaines d'adénocarcinome pulmonaire souches résistantes cellules épithéliales

H1975 cellules humaines d'adénocarcinome pulmonaire souches résistantes cellules épithéliales

Nom du produit:H1975 cellules humaines d'adénocarcinome pulmonaire souches résistantes cellules épithéliales

Marque: Shanghai Shenzhen Bio
Nombre de cellules: 1x10 ^ 6 cellules
Viabilité cellulaire: 95% (viability par Trypan Blue exclusion)
Passage cellulaire: 1: 4 ~ 1: 6 passage; Changement de liquide 2 ~ 3 fois par semaine
Conditions de croissance: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%; Température: 37℃
Tests cellulaires: les cellules ne contiennent pas de VIH - 1, de VHB, de VHC, de mycoplasmes, de bactéries, de levures et de champignons
Conditions de culture: dmem (haute teneur en sucre) + 10% FBS + 1% P / s; 37°c, 5% de CO2
Méthode de passage: 1: 2 - 1: 3 changement de liquide une fois en deux jours recommandé
Conditions de lyophilisation: lyophilisat cellulaire sans sérum
Condition de congélation: 90% FBS + 10% DMSO
Lyophilisation cellulaire: lyophilisation de l'azote liquide

Opérations de culture cellulaire
Transport de glace carbonique: les cellules doivent être transférées immédiatement à la conservation de l'azote liquide, ou à la congélation à court terme au réfrigérateur à - 80 ° C, ou à la réanimation directe
Transport à température normale: dès réception des cellules, veuillez retirer immédiatement le flacon de culture cellulaire de la boîte et suivre les étapes ci - dessous pour le passage de culture
Passage cellulaire: densité cellulaire jusqu'à 80% - 90%, prêt pour la culture de passage
Étapes de manipulation cellulaire en flacon de culture
Pour les cellules en culture murale, avant l'expédition, nous remplissons le milieu de culture avec l'ensemble du flacon de culture afin de réduire la chute des cellules en culture murale pendant le transport du produit.
1. Après avoir reçu les cellules, faites attention à observer s'il y a une contamination. Placez le flacon de culture sous un microscope inversé pour vérifier soigneusement s'il est trouble, s'il y a contamination bactérienne. Parce qu'il y a des bosses pendant le transport et que certaines cellules sont également sensibles aux changements de température, il peut y avoir des conditions dans lesquelles certaines cellules tombent et flottent, ces cellules sont encore vivantes, ne les jetez pas, vous pouvez les utiliser après un enrichissement centrifuge.
2. Pour les cellules collées, dans l'environnement de l'armoire de sécurité biologique, enlever l'excès de milieu dans le flacon de culture avec une pompe à vide, jusqu'à ce qu'il reste environ 5 - 8 ML, puis selon le milieu de culture sélectionnez la teneur en CO2 appropriée pour la culture dans un incubateur thermostaté à 37 ° C, dévisser le bouchon du flacon. Si les cellules sont déjà pleines de flacons de culture, passez - les immédiatement.
3. Pour les cellules en suspension, dans l'environnement de l'armoire de sécurité biologique, Transférez les cellules dans le flacon de culture dans le tube de centrifugation, centrifugez à 150 g pendant 5 minutes, après élimination du surnageant, soufflez les cellules avec 5 ml de milieu, Transférez - les dans un nouveau flacon de culture, puis mettez - les en culture dans un incubateur thermostaté à 37 ° C avec une teneur appropriée en CO2.
Étapes de fonctionnement des cellules de cryodépôt
Remarque: pour garantir un taux de survie élevé des cellules, décongeler la culture immédiatement après réception du produit.
1. Placez le tube de congélation dans un bain d'eau de 37 ℃ en secouant d'avant en arrière et en décongelant rapidement. Pour éviter la contamination, assurez - vous que l'orifice de congélation est placé au - dessus de la surface de l'eau. Décongeler rapidement, environ 1 minute.
2. Une fois que le liquide a fondu dans le tube de congélation, retirez - le immédiatement et utilisez un jet d'alcool pour essuyer la surface du tube de congélation. À partir de cette étape, les opérations ultérieures doivent être effectuées dans une armoire de biosécurité.
3. Transférer le liquide du lyophilisateur dans un tube à centrifuger contenant 5 ml de milieu de culture fini, centrifuger 150 g pendant 5 minutes, enlever le surnageant avec une pompe à vide.
4. Utilisez le milieu pour remettre les cellules en suspension et Transférez - les dans un nouveau flacon de culture. Pour garantir la survie de la réanimation cellulaire, utilisez le milieu après le préchauffage au bain - Marie à 37 ° c.
5. Les cellules sont cultivées dans un incubateur thermostaté à 37 ° C contenant du CO2 approprié.
Culture de passage de cellules plaquées
1. Aspirer et jeter le milieu dans le flacon de culture et ajouter du PBS pour rincer une fois.
Ajouter 1 mL d'une solution de Trypsin - EDTA à 0,25 (P / v) et incuber dans un incubateur à 37 ° C jusqu'à ce que les cellules se détachent de la paroi. Cette procédure prend environ 3 - 5 minutes.
3. Ajouter 2 ml de milieu de finition pour neutraliser la trypsine et souffler doucement les cellules de la surface du flacon de culture et laisser les cellules se disperser.
4. Recueillir la suspension cellulaire dans un tube de centrifugation de 15 ml, centrifuger 150 g pendant 5 minutes, enlever le surnageant avec une pompe à vide. Prenez la bonne quantité de milieu pour remettre les cellules en suspension et Transférez - les dans un nouveau flacon de culture pour culture.
Le passage de cellules en suspension peut se référer aux méthodes suivantes:
I. méthode de transmission directe
1. Les cellules à mettre en suspension sont pleines à 80% à 90% (la suspension cellulaire devient jaune), c'est - à - dire qu'elles sont transmises;
2. Siphonner la suspension cellulaire 1 / 2 ~ 1 / 3 avec une paille;
3. Ajouter la bonne quantité de milieu frais et poursuivre la culture.
II. Passage centrifuge (en cas de découverte de débris cellulaires)
1. Transférer la suspension cellulaire à l'intérieur du tube de centrifugation;
2.150 G centrifuger pendant 5 min, en défaussant le liquide supérieur;
3. Utiliser du milieu de culture frais pour remettre les cellules en suspension;
4. Pipette sucer la bonne quantité de suspension cellulaire, remplir un nouveau flacon de culture, puis ajouter la bonne quantité de milieu frais pour continuer la culture.
Opérations de lyophilisation cellulaire
Centrifuger à 1.1000rpm pendant 5 minutes pour enlever le surnageant. Ajouter 1 ml de cellules de resuspendation de sérum, ajouter du sérum et du DMSO en fonction du nombre de cellules, mélanger doucement, la concentration finale de DMSO est de 10%, la densité cellulaire n'est pas inférieure à 1 x 106 / ML, chaque lyophilisateur conserve 1 ml de suspension cellulaire, faites attention au lyophilisateur pour bien identifier;
Placer le tube de congélation dans une boîte de refroidissement programmée, mettre au réfrigérateur à - 80 ° C, au moins 2 heures plus tard, transférer à l'azote liquide pour le stockage par irrigation

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