Kms - 21bm - cellules humaines de myélome multiple

KMS-21BM_Cellules humaines de myélome multiple

Informations sur le produit

Nom de la cellulePour:Kms - 21bm - cellules humaines de myélome multiple

Origine du genre: personne

Sexe Âge: Les femmes,67Âge

Sources organisationnelles: épanchement pleural

Caractéristiques de croissance: Croissance en suspension

Morphologie cellulaire: Lymphocytes comme

Spécifications cellulaires: 1 X 10⁶Cellules / t25 ou lyophilisateur de 1 mL

Conditions de culture:RPMI 1640 + 10 % de sérum bovin fœtal,37 ℃, 5 % de CO2

Conditions de congélationPour: 90 % de FBS + 10 % de DMSO

Méthodes de transmission: 1:3 générations，2 - 3 jours 1 génération

Opérations de culture cellulaire

Transport de glace sèchePour:Immédiatement après réception des cellules doivent être transférées à la conservation de l'azote liquide, ou-80°CCongélation à court terme du réfrigérateur ou réanimation directe

Transport à température normalePour:Dès réception des cellules, retirer immédiatement le flacon de culture cellulaire de la boîte et suivre les étapes ci - dessous pour le passage de culture

Passage cellulairePour:Densité cellulaire jusqu'à 80% - 90%, prêt pour la culture de passage

Étapes de manipulation cellulaire en flacon de culture

Pour les cellules en culture murale, avant l'expédition, nous remplissons le milieu de culture avec l'ensemble du flacon de culture afin de réduire la chute des cellules en culture murale pendant le transport du produit.

1. Après réception des cellules, veillez à observer toute contamination. Placez le flacon de culture sous un microscope inversé pour vérifier soigneusement s'il est trouble, s'il y a contamination bactérienne. Parce qu'il y a des bosses pendant le transport et que certaines cellules sont également sensibles aux changements de température, il peut y avoir des conditions dans lesquelles certaines cellules tombent et flottent, ces cellules sont encore vivantes, ne les jetez pas, vous pouvez les utiliser après un enrichissement centrifuge.

2. Pour les cellules plaquées, dans l'environnement de l'armoire de sécurité biologique, enlever l'excès de milieu dans le flacon de culture avec une pompe à vide jusqu'à ce qu'il reste environ 5 - 8 ML, puis choisir la teneur appropriée en CO2 de 37 en fonction du milieu de culture℃Incuber dans un incubateur thermostaté, dévisser le bouchon du flacon. Si les cellules sont déjà pleines de flacons de culture, passez - les immédiatement.

3. Pour les cellules en suspension, dans un environnement d'armoire de sécurité biologique, transférer les cellules du flacon de culture dans un tube de centrifugation, centrifuger à 150 g pendant 5 minutes, après élimination du surnageant, souffler les cellules avec 5 ml de milieu de culture, transférer dans un nouveau flacon de culture, puis placer 37 à Une teneur appropriée en CO 2℃Incuber en incubateur thermostaté.

Étapes de fonctionnement des cellules de cryodépôt

Remarque: pour garantir un taux de survie élevé des cellules, décongeler la culture immédiatement après réception du produit.

1. Placer le réservoir de congélation en 37℃Remuer d'avant en arrière dans le bain d'eau pour dégeler rapidement. Pour éviter la contamination, assurez - vous que l'orifice de congélation est placé au - dessus de la surface de l'eau. Décongeler rapidement, environ 1 minute.

2. Une fois que le liquide a fondu dans le lyophilisateur, retirez - le immédiatement et appliquez un jet d'alcool pour essuyer la surface du lyophilisateur. À partir de cette étape, les opérations ultérieures doivent être effectuées dans une armoire de biosécurité.

3. Le liquide du lyophilisateur est transféré dans un tube à centrifuger contenant 5 ml de milieu de finition, 150 g sont centrifugés pendant 5 minutes et le surnageant est éliminé à l'aide d'une pompe à vide.

4. Utilisez le milieu de culture pour remettre les cellules en suspension et Transférez - les dans un nouveau flacon de culture. Pour garantir la survie de la réanimation cellulaire, placez le milieu à 37℃Le bain d'eau est utilisé après le préchauffage.

5. Placer les cellules en 37 contenant le CO2 approprié℃Incuber en incubateur thermostaté.

Culture de passage de cellules plaquées

1. Aspirer et jeter le milieu dans le flacon de culture, ajouter pBSRincer une fois.

2. Rejoindre 10,25 mL (p/v) Trypsine-EDTASolution, et mettre 37Incuber dans l'incubateur ℃ jusqu'à ce que les cellules se détachent de la paroi. Ce processus prend environ 3-5Minutes.

3. Rejoignez 2mLTerminer le milieu neutralise la trypsine et souffler doucement pour faire tomber les cellules de la surface du flacon de culture et permettre aux cellules de se disperser.

4. Recueillir la suspension cellulaire à15 mlDans le tube de centrifugation,Centrifugation à 150 g pendant 5 minutesEnlever le dégagement supérieur avec une pompe à vide. Prenez la bonne quantité de milieu pour remettre les cellules en suspension et Transférez - les dans un nouveau flacon de culture pour culture.

Le passage de cellules en suspension peut se référer aux méthodes suivantes:

I. méthode de transmission directe

1. Les cellules à suspendre sont pleines à 80% à 90% (la suspension cellulaire devient jaune), c'est - à - dire qu'elles sont transmises;

2. UtiliserpailleAspiration de la suspension cellulaire 1 / 2 ~ 1 / 3;

3. Ajouter la bonne quantité de milieu frais et poursuivre la culture.

   II. Passage centrifuge (en cas de découverte de débris cellulaires)

4. Transférer la suspension cellulaire àTubes centrifugesIntérieur;

5. Centrifuger à 150 g pendant 5 min en éliminant le liquide supérieur;

6. Resuspendre les cellules à l'aide d'un milieu de culture frais;

7. Pipette sucer la bonne quantité de suspension cellulaire, charger le nouveauBouteille de cultureAjouter la bonne quantité de milieu frais et poursuivre la culture.

Opérations de lyophilisation cellulaire

1. Centrifuger à 1000 RPM pendant 5 minutes pour enlever le surnageant. Ajouter 1 ml de sérum pour remettre en suspension les cellules, ajouter le sérum et le DMSO en fonction du nombre de cellules, mélanger doucement，Concentration finale de DMSO de 10% et densité cellulaire non inférieure à 1 x 10⁶/mL， Chaque lyophilisateur congèle 1ml de suspension cellulaire, en prenant soin de bien identifier les lyophilisateurs;

2. Placer la lyophilisateur dans une boîte de refroidissement programmée, placer au réfrigérateur à - 80 ° C et au moins 2 heures plus tard transférer au stockage par irrigation à l'azote liquide.

Certaines des cellules associées sont les suivantes:

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