HEC - 1 - B cellules humaines d'adénocarcinome endométrial

Nom du produit:HEC - 1 - B cellules humaines d'adénocarcinome endométrial

Marque: Shanghai Shenzhen Bio
Nombre de cellules: 1x10 ^ 6 cellules
Viabilité cellulaire: 95% (viability par Trypan Blue exclusion)
Passage cellulaire: 1: 4 ~ 1: 6 passage; Changement de liquide 2 ~ 3 fois par semaine
Conditions de croissance: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%; Température: 37℃
Tests cellulaires: les cellules ne contiennent pas de VIH - 1, de VHB, de VHC, de mycoplasmes, de bactéries, de levures et de champignons
Conditions de culture: dmem (haute teneur en sucre) + 10% FBS + 1% P / s; 37°c, 5% de CO2
Méthode de passage: 1: 2 - 1: 3 changement de liquide une fois en deux jours recommandé
Conditions de lyophilisation: lyophilisat cellulaire sans sérum
Condition de congélation: 90% FBS + 10% DMSO
Lyophilisation cellulaire: lyophilisation de l'azote liquide

Cellules au post - traitement

Le remplissage du liquide de culture et la fermeture de l'embouchure de la bouteille après que les cellules aient été cultivées en bon état dans un flacon de culture est la méthode de transport cellulaire. Après avoir reçu les cellules de retour à leur propre laboratoire, ouvrez d'abord l'emballage extérieur, utilisez75% d'alcool pulvérisé toute la bouteille après désinfection à l'intérieur de la table ultra - propre, opération strictement stérile, incubateur de repos2 - 4 heures. observation sous miroir: pas dépasséÀ 80% de confluence, le liquide de culture peut être mis en bouteilleRecueillir dans le tube de centrifugation, ajouter6 ml de milieu, mettre37°c, incubation en incubateur à 5% de CO2; Au - delà de 80% de confluence, en fonction du passage ou de la congélation, voir les étapes de culture cellulaire pour les opérations spécifiques.（Notez que l'expédition est scellée bouteille de culture, mettre dans l'incubateur pour cultiver Rappelez - vous que le couvercle de la bouteille de culture est dévissé, après le passage recommande une bouteille avec le milieu de culture dans la bouteille d'origine, une autre bouteille avec son propre milieu de culture) et

HEC - 1 - B cellules humaines d'adénocarcinome endométrialÉtapes de culture

Un,Cellules de réanimation: contiendraUn lyophilisateur de 1 ml de suspension cellulaire est décongelé rapidement sous agitation dans un bain - Marie à 37°c, 5 ml de milieu de culture sont ajoutés pour bien mélanger. Centrifuger à 1000 RPM pendant 5 minutes, éliminer le surnageant, compléterBien souffler après 4 - 6 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées à la culture dans le flacon de culture pendant la nuit (ou la suspension cellulaire est ajoutée)Dans un plat de 6cm), cultivé pendant la nuit. Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

Deux,Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint80% - 90%, c'est - à - dire la culture de passage.

a）、 Pour les cellules adhérentes, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 1 - 2 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans un flacon de culture, placer à 37 ℃ incubateur pour digérer pendant 1 - 2 min, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter Quelques flacons de culture après avoir ajoutéPlus de 5mlContient10% de sérumLe milieu de culture termine la digestion.

3. Soufflez doucement les cellules, aspirez après la chute, centrifugez à 1000 RPM pendant 8 - 10 minutes, jetez le surnageant, ajoutez 1 - 2 ml de solution de culture et soufflez bien.

4. Compléter la solution de culture par 5 - 6 ml / flacon et distribuer la suspension cellulaire dans un rapport de 1: 2 dans de nouvelles boîtes ou des flacons contenant 5 - 6 ml de solution de culture.

b）、 Pour les cellules en suspension, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

Méthode 1: les cellules sont collectées, centrifugées pendant 8 - 10 minutes à 1000 RPM, le surnageant est jeté, soufflé après l'addition supplémentaire de 1 - 2 ml de la solution de culture, la suspension cellulaire est divisée dans de nouvelles boîtes ou des bouteilles neuves contenant 8 ml de milieu dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.

Méthode 2: la moitié de la solution peut être choisie, après avoir abandonné la moitié du milieu, les cellules restantes sont suspendues et la suspension cellulaire est divisée dans une nouvelle boîte de 8 ml de milieu ou dans un flacon dans un rapport de 1: 2 à 1: 3.

PS :Si le client reçoit2ml de cellules tubulaires, après avoir reçu les cellules, pulvériser l'ensemble du tube avec de l'alcool à 75% après la désinfection dans une table ultra - propre ou une armoire de sécurité, opération strictement stérile; Transfert des cellules tubulaires dans un flacon de culture t25 ouBoîte de pétri de 6 cm, ajouter 5 ml de milieu de culture gauche et droite pour mélanger, mettre dans l'incubateur pendant la nuit après la culture pour voir la densité cellulaire: si la densité n'est pas supérieure à 80%, le changement de liquide continue la culture, selon le cas, le passage ou la congélation. Si la densité est supérieure à 80%, le passage peut être effectué directement (ibid.).

Trois,Stockage des cellules congelées:(Remarque: pour la méthode de lyophilisation des cellules sans sérum, veuillez vous référer à notre division)

1, croissance des cellules pour couvrir le flacon de cultureÀ 80% de la surface, jeter le liquide de culture dans un flacon de culture de 25 cm 2 et laver les cellules une fois avec du PBS;

2, ajouter0,25% de digestat d'environ 1 mL dans un flacon de culture, visualiser au microscope inversé, ajouter le liquide de culture après la rétraction des cellules à arrondir pour terminer la digestion, souffler doucement les cellules pour les faire tomber, puis transférer la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

3, resuspendre les cellules avec la bonne quantité de lyophilisat et placer dans le lyophilisateur;

4, placez d'abord le lyophilisateur cellulaire sur- 20 ℃ 1,5 H, puis le déplacer à - 80 ℃

Certaines des cellules associées sont les suivantes: