Plaque poreuse de détection à haut débit de contractilité cellulaire

Contexte:

Les cellules ont la capacité de produire de la force, et les cellules utilisent la force physique pour effectuer des fonctions vitales – lorsque cette force est détruite, raccourcie et prolongée pendant l’exécution de fonctions vitales, la maladie suit. Traditionnellement, il était difficile de mesurer de telles forces, mais les deux nouvelles méthodes suivantes permettent maintenant de mesurer simultanément les forces produites par des cellules de milliers de cellules.

Protocole d'essai:

I. détection à haut débit de contractilité cellulairePlaques perforées - plaques 24, 96, 384 puits:

Figure 1: schéma de principe:

1.1) test de contractilité cellulaire plaque de 24 puits

1.2)Test de contractilité cellulaire plaque 96 puits

1.3) test de contractilité cellulaire 384 puits plaque

Cette plaque poreuse permettant de détecter à haut débit la contractilité cellulaire est* microplaques avec micro - motifs fluorescents encastrés dans le fond du film souple,Il y a plus de 100 000 micromotifs de protéines visqueuses uniformément répartis en forme de X ou + sur lesquels les cellules se déposent et s'attachent,X noyé dans la plaque est élastique,Ainsi, chaque fois que les cellules se contractent, elles se contractent.X porte des marqueurs moléculaires qui peuvent émettre de la fluorescence, ce qui permet d'imager et de quantifier des formes réduites.

Il peut être imagé et quantifié, de sorte que les chercheurs peuvent associer la déformation d'un X ou d'une croix à une certaine quantité de force dans une seule cellule ou des milliers de cellules. La technique a également donné aux chercheurs la possibilité de voir les réponses calciques des cellules individuelles et la relation entre elles et la force cellulaire.

Cette technique peut également être utilisée pour la découverte de médicaments. Les chercheurs peuvent rapidement et facilement tester différentes molécules thérapeutiques pour voir comment elles affectent la force cellulaire et si des problèmes de force potentiels peuvent être corrigés.

Avec contrôle justeLe film élastique Degree est incrusté de micro - motifs adhésifs et fluorescents conçus par l'utilisateur, formant un réseau très dense mais homogène (> 120 microns par millimètre carré). 100 000 cellules uniques d'origine patiente (obtenues à partir de tissus humains d'origine de la maladie) sont positionnées indépendamment et adhèrent à un micromotif (une cellule par micromotif) sur lequel elles exercent une traction et modifient visiblement leur forme, permettant une évaluation intuitive basée sur l'image de la contractilité cellulaire à un débit de *.

1) MICROPATTERNING de surface rétractable élastique fluorescente
- avec contrôleLe film élastique Degree est incrusté de micro - motifs adhésifs et fluorescents conçus par l'utilisateur, formant un réseau très dense mais homogène (> 120 microns par millimètre carré). 100 000 cellules uniques d'origine patiente (obtenues à partir de tissus humains d'origine de la maladie) sont positionnées indépendamment et adhèrent à un micromotif (une cellule par micromotif) sur lequel elles exercent une traction et modifient visiblement leur forme, permettant une évaluation intuitive basée sur l'image de la contractilité cellulaire à un débit de *.

2) visualisation cinétique de la contractilité unicellulaire contrôlée basée sur des images
Par exemple, les micromodèles de chaque cellule attachée à l'intérieur d'une plaque de 384 puits ont été surveillés indépendamment avec une résolution temporelle fine sur une période prolongée pour observer directement toute la gamme du comportement Contractile, de la contraction de tension à la contraction ou à la relaxation induite, ainsi que la fenêtre d'action de l'un ou l'autre effet. Les micro - motifs en forme de « X » ont été choisis pour miniaturiser la surface de contact cellule - substrat tout en maximisant la surface de diffusion cellulaire, créant ainsi des forces amplifiées et concentrées à différents endroits. Chaque micromotif étant mécaniquement séparé des autres, les cellules adhérentes ne transmettent pas de déformation aux micromotifs voisins, assurant ainsi une évaluation fiable de la contractilité de chaque cellule individuelle de la population.

3) Analyse d'image automatisée et intuitive de la contractilité unicellulaire
- la détection basée sur cette méthode produit un signal de contraction intuitif et clair - fournissant une analyse d'image directe pour obtenir des données quantitatives et fiables de chaque cellule unique de la population imagée.

Les données de contractilité de plus de 1 000 cellules individuelles à motifs uniformes * peuvent être acquises simultanément et intégrées de manière transparente aux formats de plaques 96 et 384 puits pour faciliter le dépistage de médicaments à grande échelle.

II. Introduction au microscope de traction cellulaire et au réseau de microcolonnes

Figure 4: microscopie de traction cellulaire

Figure 5: réseau de microcolonnes cellulaires,Rigidité, taille, forme et espacement personnalisables.

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