Cellules d'adénocarcinome colorectal humain souche résistante au cisbo hct15 / DDP

Nom de la cellule:Cellules d'adénocarcinome colorectal humain souche résistante au cisboHCT15/DDP　

Numéro de fret:WS155(HCT15)STR 鉴定）　　

Spécifications:1 x 10⁶ cellules / bouteille de culture t25

Utilisation: pour usage scientifique seulement

I. Introduction aux cellules

Cette cellule estSouches de cellules résistantes au DDP construites par des cellules hct15.

II. Caractéristiques cellulaires

1) Source: cancer du rectum

2) morphologie: cellules épithéliales comme, croissance de Gabir

3) Contenu: > 1x106 nombre de cellules

4) Spécification: bouteille de t25 ou paquet de lyophilisateur de 1ml

5) Utilisation: utilisation scientifique seulement.

Iii. Préparation du milieu de culture et des conditions de congélation

1)Voir les instructions pour plus de détails.

Sérum nous recommandons FBS500-WP-002

2) conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 degrés Celsius, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.

3) lyophilisat: 90% sérum, 10% DMSO, maintenant utilisé avec un dosage actuel.

Quatre,Traitement cellulaire

1) réanimation des cellules conservées congelées

ContiendraUn tube de lyophilisation de 1 ml de la suspension cellulaire est décongelé sous agitation rapide dans un bain - Marie à 37 ° C, ajouté à un tube à centrifuger contenant 4 - 6 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifugation 3 - 5 min à 1000 RPM, élimination du surnageant, milieu de cultureCellules suspendues. La suspension cellulaire est ensuite ajoutée à des flacons (ou boîtes) contenant 6 - 8 ml de milieu pour incubation à 37°c pendant une nuit. La croissance cellulaire et la densité cellulaire sont observées au microscope le lendemain.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

Pour le passage de cellules adhérentes, on peut se référer aux méthodes suivantes:

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 0,25% (P / v) de leucose pancréatique - 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL), placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger le temps de digestion de manière appropriée), puis observer la digestion des cellules au microscope, si une grande partie des cellules s'arrondit et tombe, revenir rapidement à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après l'ajout de 3 - 4 ml de milieu contenant 10% de FBS pour terminer la digestion.

3. Bien mélanger doucement et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, jeter le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture et bien souffler. La suspension cellulaire est divisée dans de nouveaux flacons t25 dans un rapport de 1: 2, 6 - 8 ml de nouveau milieu configuré selon les instructions sont ajoutés pour maintenir la viabilité de croissance des cellules, et les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la réalité.

Remarque: passage cellulaire1 ~ 2 fois peut encore maintenir la prolifération, c'est - à - dire augmenter la concentration du médicament à 0,5 ug / ML continuer la culture; Si les cellules cessent de proliférer au cours de ce processus et sont en mauvais état, vous devez réduire la concentration de médicament (réduire la moitié de la concentration de médicament) ou utiliser un milieu de culture sans médicament pour la culture à une densité cellulaire d'environ 8 × 105 PCS / ML et, lorsque la croissance est meilleure, remplacer par la concentration de médicament souhaitée.

3) lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture.

ci-dessousExemple de flacon t25;

1. Les cellules sont congelées en suivant le processus de passage des cellules pour collecter les cellules bien digérées dans le tube de centrifugation, qui peut être compté à l'aide de la plaque de comptage des globules pour déterminer la densité de stockage des cellules congelées. La densité de lyophilisation recommandée pour les cellules générales est de 1 × 106 ~ 1 × 107 cellules vivantes / ML.

Centrifuger à 1000rpm pendant 3 - 5min, enlever le surnageant. Les cellules sont remises en suspension avec le lyophilisat cellulaire formulé, chaque ml de lyophilisat contient 1 × 106 ~ 1 × 107 cellules vivantes / ML dans un lyophilisateur pour distribuer les cellules dans un lyophilisateur, étiqueté avec le nom, l'algèbre, la date et d'autres informations.

Remarque: aucun médicament ne peut être ajouté pendant la lyophilisation des cellules.

2.placez les cellules à geler dans la boîte de refroidissement du programme, - 80 degrés réfrigérateur pendant la nuit, après quoi transférer dans un récipient d'azote liquide pour le stockage. La position du bon réservoir de congélation dans le réservoir d'azote liquide est enregistrée simultanément pour une consultation et une utilisation ultérieures.

Cellules d'adénocarcinome colorectal humain souche résistante au cisbo hct15 / DDP