Cellules de gliome humain u373

Cellules de gliome humainU373

Introduction:Ligne cellulaire problématique : mal identifiée/contaminée. Il s'agit d'un dérivé de l'U-251MG. Cette lignée cellulaire n'est pas la lignée cellulaire d'astrocytome originale établie en 1973 à l'Université d'Uppsala. Voir U-373MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_2818) pour la lignée cellulaire originale U-373MG.

RéférencePour:WS-S1465

spécificationPour:1 x 10⁶ cellules / flacon de culture t25

I. informations de base sur les cellules

- origine cellulaire: cerveau

- morphologie cellulaire: cellules épithéliales comme, croissance de l'épithélium

- contenu cellulaire: > 1 × 10⁶ cellules / flacon

- spécifications de l'emballage: bouteille de culture t25 / lyophilisateur 1ml

- utilisation du produit: uniquement pour la recherche scientifique,Ne peut pas être utilisé comme produit thérapeutique pour les maladies animales ou humaines.

Deux, Règles de traitement le jour de la réception des cellules à température normale

Étape: réception et inspection

· Étapes 1, 2 de la partie exécution (processus commun).

Étape 2: remplacer le milieu de culture avec la collecte de cellules

· derrière la bouteille stérilisée, ouvrez le bouchon dans le plan de travail ultra - net.

· remplacer par le milieu de culture fourni avec l'envoi.

· remarque spéciale: Si vous trouvez plus de cellules en suspension au microscope, Transférez tout le milieu dans le flacon dans un tube de centrifugation stérile, centrifugez (par exemple, 1200 RPM, 5 min) pour collecter les cellules et éliminer l'ancien milieu.

· après avoir terminé le remplacement ou la collecte, placez le flacon de culture dans l'incubateur et laissez reposer pendant 2 à 3 heures.

Troisième étape: post - traitement au repos (selon la densité cellulaire)

Trois, Étapes opératoires du passage cellulaire

A. passage des cellules adhérentes

1. Préparation: aspirer l'ancien milieu de culture.

2. Rinçage: ajouter lentement du PBS et d'autres liquides de rinçage le long de la paroi latérale du flacon de culture, secouer doucement après avoir aspiré pour éliminer le sérum résiduel.

3. Digestion: ajoutez l'enzyme Yi préchauffée (comme t25 plus 1ml) et agitez doucement pour que l'enzyme Yi couvre toutes les cellules.

4. Incubation: digestion à température ambiante pendant environ 2 minutes (le temps varie d'une cellule à l'autre).

5. Observation: observation au microscope jusqu'à ce que ≥ 90% des cellules deviennent rondes et tombent. Si elle n'est pas atteinte, elle peut être vérifiée toutes les 30 secondes.

Terminaison: lorsque les cellules sont suffisamment dissociées, la digestion est terminée immédiatement par l'ajout de deux fois le volume d'enzyme Yi du milieu préchauffé.

7.blow: soufflez doucement la paroi du flacon avec une pipette pour que les cellules tombent et se dispersent en suspension unicellulaire.

8. Centrifugation: Transférez la suspension cellulaire dans le tube de centrifugation, centrifugez 200 × g pendant 3 - 5 minutes, Défrichez.

9. Resuspendation et inoculation: resuspendation des cellules avec une petite quantité de milieu frais et, après dilution dans les proportions appropriées, inoculation dans un nouveau flacon de culture.

10. Culture: mettre dans l'incubateur. Si vous utilisez un bouchon normal, assurez - vous de desserrer le bouchon pour faciliter l'échange de gaz.

B. passage de cellules en suspension

1. Collecte et centrifugation: Transférez toute la suspension cellulaire dans le tube de centrifugation, centrifugez à 1000 RPM pendant 5 minutes, Défrichez.

2. Resurfaçage: ajouter 1 - 2 ml de milieu frais et remettre doucement les cellules en suspension.

3. Inoculation: la suspension cellulaire est transmise à un nouveau flacon de culture t25 dans un rapport de 1: 2 et complétée par une quantité totale de milieu de culture de 5 à 8 ML.

4. Culture: mettre dans l'incubateur pour continuer la culture.

Quatre, Traitement de problèmes particuliers: cellules plaquées qui tombent pendant le transport

Les cellules partiellement tapissées tomberont dans le transport, phénomène normal, traité comme suit:

1. Collecte: transférer tout le milieu dans le flacon dans un tube de centrifugation stérile et centrifuger (1200 RPM, 3 - 5 min) pour défricher.

2. Nettoyage: remettre les cellules en suspension avec du PBS, centrifuger à nouveau (1200rpm, 3 - 5min) pour éliminer le PBS.

3. Digestion: ajouter environ 1 mL d'enzyme Yi 0,25%, mélanger doucement (ne pas souffler vigoureusement), mettre dans l'incubateur pour digérer pendant 1 - 2 minutes.

Terminaison et dispersion: après l'extraction, souffler doucement pour disperser la masse cellulaire, ajouter rapidement 3 - 5 ml de milieu pour terminer la digestion, centrifuger (1200 RPM, 3 - 5 min) pour éliminer le nettoyage.

5. Resurfaçage et inoculation: ajouter 5 ml de milieu de culture resurfaçage et ensemencer proportionnellement dans un nouveau flacon / boîte de pétri.

6. Observation: observation sous miroir. Si les cellules sont simples ou en petits groupes de seulement 3 - 5 cellules, ils peuvent être cultivés normalement jusqu'à ce qu'ils se développent. - -

Cinq, Résumé de la politique de service après - vente

Conseils importants: tout problème anormal,Le temps de prendre des photosEt nous contacter est la clé pour obtenir un soutien après - vente.