Cellules cancéreuses de l'endomètre humain efe184

Cellules cancéreuses de l'endomètre humainEFE184

Introduction:La lignée cellulaire efe184 a été établie à partir de l'ascite d'une femme de 69 ans atteinte d'un cancer de l'endomètre récidivant. Cette cellule est morphologique en une seule couche de cellules épithéliales qui se développent très lentement. La lignée cellulaire efe184 peut être utilisée pour la culture cellulaire 3D et la recherche sur le cancer.

RéférencePour:du WS-S1480

spécificationPour:1 x 10⁶ cellules / flacon de culture t25

I. informations de base sur les cellules

- origine cellulaire: in situ: utérus; Site de transfert: ascite

- morphologie cellulaire: cellules épithéliales comme, croissance de l'épithélium

- contenu cellulaire: > 1 × 10⁶ cellules / flacon

- spécifications d'emballage: flacon de culture t25 / lyophilisateur de 1 mL

- utilisation du produit: uniquement pour la recherche scientifique,Ne peut pas être utilisé comme produit thérapeutique pour les maladies animales ou humaines.

II. Milieu et conditions de culture

1. Milieu de culture

Milieu rpmi1640; 10% de sérum de veau foetal; 1% double résistance

Sérum recommandé:WinSera FBS500 - WP-002

2. Conditions de culture

- phase gazeuse: 95% air + 5% co₂ température: 37°c; Humidité de l'incubateur: 70% - 80%

3. Stockage et stockage par congélation

- lyophilisat: 90% sérum de veau foetal + 10% DMSO (maintenant disponible)

- conditions de stockage: conservation à long terme de l'azote liquide

Iii. Formes de transport et traitement à la réception

1. Expédition à température normale (bouteille t25 de cellules vivantes)

Après avoir reçu les cellules, d'abord La désinfection de surface du corps du flacon de culture t25; Placer le flacon de culture dans l'incubateur et laisser reposer pendant 2 - 3 heures; Observer la densité cellulaire et l'état de croissance, prendre 2 - 3 photos claires de retour à la vente; La densité cellulaire peut être atteinte pour le passage, le rapport de passage préalable recommandé est de 1: 2; Une fois que les cellules sont à nouveau pleines, un des flacons entiers de cellules est congelé sous forme de 1 tube lyophilisateur de 1 mL et l'autre flacon est soumis à un passage continu; Après la congélation répétée de 2 - 3 cellules de semences, il est recommandé de procéder à des expériences d'amplification supplémentaires pour éviter la fragmentation cellulaire en raison de circonstances soudaines.

Remarque: le milieu utilisé pour le transport (milieu de perfusion) ne peut plus être utilisé pour la culture des cellules, veuillez le remplacer par un milieu fraîchement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour la culture des cellules. Réception des recommandations de post - passage cellulaire Les flacons de culture t25 sont passés à 1: 2.

2. Expédition de glace sèche (cellules de lyophilisateur)

L'expédition régulière est 2 tubes de congélation, il est recommandé de réanimer 1, de conserver 1 de réserve; Si la récupération échoue, strictement selon le processus de récupération standard du fabricant pour opérer la deuxième branche; Si les deux échouent, conservez immédiatement une photo du processus de réanimation et informez - en le traitement des ventes.

Iv. Étapes de culture cellulaire

1. Réanimation des cellules conservées congelées

- placer 1 ml de lyophilisateur de suspension cellulaire dans un bain - Marie à 37°c, agiter rapidement jusqu'à décongélation;

- Ajouter dans un tube à centrifuger contenant 4 - 6 ml de milieu et mélanger doucement;

- centrifuger à 1000rpm pendant 3 - 5 minutes, jeter le surnageant;

- resuspendre les cellules avec le milieu, ensemencer dans des flacons / boîtes contenant 6 - 8 ml de milieu;

- 37 ° C de culture pendant la nuit, le lendemain au microscope pour observer l'état de croissance cellulaire et la densité.

2. Pour le passage des cellules plaquées peut se référer à la méthode suivante: (densité cellulaire 80% - 90% passable)

- jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

- Ajouter 0,25% (P / v) de protéase Yi - 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL), placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger le temps de digestion de manière appropriée), puis observer la digestion des cellules au microscope, si la plupart des cellules deviennent arrondies et tombent, revenir rapidement à la table d'opération, tapoter quelques fois sur le flacon de culture et ajouter 3 - 4 ml de milieu contenant 10% de FBS pour terminer la digestion.

- bien agiter et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, éliminer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture et bien souffler. La suspension cellulaire est divisée en flacons neufs t25 dans un rapport de 1: 2, 6 - 8 ml d'un nouveau milieu de culture configuré selon les instructions sont ajoutés pour maintenir la viabilité de croissance des cellules, et les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 - 1: 5 selon les circonstances réelles.

3. Pour les cellules en suspension, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:

- remarque: le rapport de génération recommandé pour la génération suivante est de 1: 2, le rapport de génération ultérieure peut être déterminé à la discrétion du client.

- Méthode 1: recueillir les cellules, centrifuger pendant 4 minutes à 1000 RPM, éliminer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de la solution de culture après soufflage, distribuer la suspension cellulaire dans de nouvelles boîtes ou des flacons contenant 8 ml de milieu dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.

- méthode 2: la moitié de la solution peut être choisie, après avoir éliminé la moitié du milieu, les cellules restantes sont suspendues et la suspension cellulaire est divisée dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu dans un rapport de 1: 2 à 1: 3 ou dans des flacons.

Lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture.

V. Considérations relatives à la biosécurité

1. Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses pour la biologie et doivent être manipulées à l'intérieur de l'armoire de biosécurité de classe er pour une bonne protection individuelle; Tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec les cellules peuvent être jetés après stérilisation.

Lors de la réanimation des cellules gelées, portez toujours des gants de protection, un masque protecteur Fu et Hu; Le réservoir de congélation immergé dans l'azote liquide peut avoir des fuites et être rempli d'azote liquide, la gazéification de l'azote liquide lors de la décongélation peut provoquer l'éclatement du récipient, l'avalanche du bouchon de la bouteille causant des rayures et d'autres blessures, il est important de faire preuve de prudence lors de l'opération.