Services de préparation d'anticorps monoclonaux

Les anticorps monoclonaux (MAB) sont des anticorps produits par des déterminants antigéniques spécifiques à l'aiguille, la technologie monoclonale, également connue sous le nom d'hybridome, a été créée en 1975 par G. Kohler et Milstein. Le principe principal est de produire des anticorps en utilisant des cellules B productrices d'anticorps qui s'hybrident avec des cellules tumorales pour fusionner en cellules d'hybridome.

La technique de l'hybridome pour la préparation d'un anticorps monoclonal est une étape principale du ciblage du corps comprenant:

(1) Préparation de l'antigène,

(2) animaux immunisés,

(3) la préparation de splénocytes immunitaires et de cellules de myélome,

(4) Fusion cellulaire;

(5) Culture sélective de cellules d'hybridomes,

(6) dépistage des cellules d'hybridome;

(7) clonage des cellules d'hybridome;

(8) Détection des anticorps monoclonaux;

(9) Établissement de lignées cellulaires d'hybridomes sécrétant des anticorps monoclonaux:

(10) Préparation massive d'anticorps monoclonaux.

Procédé de préparation des anticorps monoclonaux:

1, immunisation des animaux l'immunisation des animaux est le processus d'immunisation des souris avec l'antigène d'objectif, de sorte que les souris produisent des lymphocytes B sensibilisés. Des souris BALB / C femelles âgées de 6 à 8 semaines sont généralement sélectionnées pour l'immunoinjection selon un protocole d'immunisation préétabli. L'antigène pénètre dans l'organe immunitaire périphérique par la circulation sanguine ou lymphatique, stimulant les clones de lymphocytes B correspondants pour les activer, les multiplier et les différencier en lymphocytes B sensibilisés.

2, la fusion cellulaire utilise la méthode de saignement de l'ablation oculaire pour tuer la souris, l'opération stérile pour extraire la rate, presser le broyage à l'intérieur d'une boîte plate, préparer une suspension de splénocytes. Les cellules de myélome allophylétique préparées ont été mélangées avec des splénocytes de souris dans des proportions déterminées et le polyéthylène glycol promoteur a été ajouté. Sous polyéthylène glycol, divers lymphocytes peuvent fusionner avec des cellules de myélome pour former des cellules d'hybridome.

3, le but de la culture sélective est de cribler les cellules fusionnées d'hybridome, généralement en utilisant le milieu sélectif hat. Dans le milieu Hat, les cellules de myélome non fusionnées sont mortes en raison d'un manque d'hypoxanthine - guanine - Phospho - ribostransférase et de l'incapacité de synthétiser l'ADN en utilisant la voie de réparation. Les lymphocytes non fusionnés, bien que possédant une hypoxanthine - guanine - phosphoribostransférase, ne peuvent pas survivre longtemps in vitro et meurent progressivement. Seules les cellules fusionnées d'hybridome survivent et prolifèrent dans le milieu hat en raison de l'obtention de l'hypoxanthine guanine phospho - ribostransférase à partir de cellules spléniques et de la propriété que les cellules de myélome peuvent proliférer indéfiniment.

Criblage et clonage de clones positifs d'hybridome les cellules d'hybridome cultivées dans le milieu Hat, seulement quelques - unes sont des cellules sécrétant des anticorps monoclonaux spécifiques prédéterminés, et doivent donc être criblées et clonées. La culture clonale des cellules d'hybridomes est généralement réalisée par une méthode de dilution limitée. Les cellules d'hybridome positives capables de produire l'anticorps monoclonal désiré sont criblées et amplifiées clonalement par une méthode immunologique sensible, rapide et spécifique.

Après identification complète du type d'immunoglobuline, de la Sous - classe, de la spécificité, de l'affinité, de l'épitope reconnaissant l'antigène et de sa molécule de l'anticorps monoclonal sécrété, la lyophilisation est effectuée dans le temps.

5,Préparation en grandes quantités d'anticorps monoclonaux préparation en grandes quantités d'anticorps monoclonaux adoption importante de la pathogénie in vivo et somatique chez l'animal

Méthode de culture externe.

(1) induction in vivo de souris BALB / C, d'abord par injection intrapéritonéale 0. 5 ml de silex liquide ou d'hypanthane sont prétraités. Après 1 - 2 semaines, les cellules d'hybridome sont inoculées par voie intrapéritonéale. Les cellules d'hybridome prolifèrent dans la cavité abdominale de la souris et produisent et sécrètent des anticorps monoclonaux. Environ 1 - 2 semaines, l'abdomen gonflé est visible chez les souris. L'ascite est prélevée à l'aide d'une seringue, ce qui permet d'obtenir une grande quantité d'anticorps monoclonaux.

(2) La méthode de culture in vitro place les cellules d'hybridome dans un flacon de culture pour la culture. Au cours de la culture, les cellules d'hybridomes produisent et sécrètent des anticorps monoclonaux, le surnageant de culture est recueilli et les cellules et leurs fragments sont éliminés par centrifugation, ce qui permet d'obtenir les anticorps monoclonaux souhaités. Mais cette méthode produit une quantité limitée d'anticorps. Au cours des dernières années, divers nouveaux types de techniques et de dispositifs de culture ont fait leur apparition, augmentant considérablement le volume de production d'anticorps. Après la fusion des cellules de l'hybridome, il est nécessaire de procéder à un dépistage avant de pouvoir l'utiliser. Les cellules d'hybridome sont divisées en deux fois: une, les cellules d'hybridome sont criblées; II. Dépistage des cellules d'hybridomes capables de produire des anticorps spécifiques dans les cellules d'hybridomes primaires, les méthodes et les principes de ces deux dépistages étant différents.

Service en partie expérimental