Neuro2a (n2a) Cellules de neurome cérébral de souris

Introduction aux cellules

clonageNeuro-2AEst parpar R.J.KlebeetF.H. RuddleParALa tumeur autogène de la souche de souris blanches est établie. La cellule produit une grande quantité de Tubuline, une protéine qui agit comme un système Contractile dans les cellules nerveuses pour répondre au flux plasmatique Axial.

Caractéristiques des cellules

1)Source:Neuroblastome du cerveau

2)MorphologiePour:Cellules souches amibiennes

3)Contenu:>1x10⁶ Nombre de cellules

4)Spécifications:T25bouteilleou1 mlEmballage de tube de congélation

5) Utilisation:Pour usage scientifique seulement.

Transport et conservation:glace sèchetransportEt la récupération pour survivreLes cellulesPour:（1) et1 mlConteneur de congélation emballage transport de glace sèche, après réception-80Degrés réfrigérateur conservé pendant la nuit après transfert à l'azote liquide ou réanimation directe,S'il s'avère que la glace carbonique s'est volatilisée,Le bouchon du tube de congélation tombe,Bris et contamination des cellules, contactez - nous maintenantcontact.(2) etT25Survie de la récupération de bouteilleLes cellulesExpédition à température normale,recevoirAprès cela, suivez la méthode de traitement après réception cellulaire.

Après réception cellulaireTraitement de:

1), après réception des cellules,75%La paroi de la bouteille de désinfection de l'alcool seraT25La bouteille est placée37℃ incubateur placé environ2-3hSi vous trouvez des bouteilles de culture cassées, des déversements de liquide et des cellules contaminées, veuillez nous contacter rapidement après avoir pris des photos.

2) s'il vous plaît dans4ou5XConfirmez l'état des cellules au microscope tout en prenant des photos des cellules que vous venez de recevoir (10×,20×) Chaque2 - 3Une photo de l'apparence du flacon de culture est conservée comme base de l'état des cellules lors de la réception après - vente.

3) etCellules adhérentes: cellules dans37℃ placé dans l'incubateur2-3hSous le microscope pour observer la croissance des cellules et l'application des parois, certaines cellules de l'application des parois dans le processus d'expédition Express sera en raison de la vibration de tomber et après la formation de la masse. Si vous regardez la densité de croissance des cellules sous le miroir si60%Ci - dessous, le milieu de perfusion peut être retiré du flacon de culture (s'il y a des cellules non collées qui doivent être récupérées par centrifugation, remises en suspension dans le flacon de culture d'origine),Ajouter le milieu spécial nouvellement formulé6 à 8 mlPlacer dans l'incubateur de cellules pour poursuivre la culture. Si la densité de croissance cellulaire est70% - 80%Ci - dessus, les cellules peuvent être traitées par passage. Pendant le passage, si les cellules tombées en raison des vibrations de transport doivent être récupérées par centrifugation.

4) etRemarque: le milieu utilisé pour le transport (milieu de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, Remplacez - le par un milieu spécialisé fraîchement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Première recommandation de passage après réception des cellulesT25Bouteille de culture1Pour:2Génération

Un.Milieu de cultureEtCultiverStockage congeléPréparation des conditions:

1)préparerMEMMilieu de culture;de qualitéSérum de veau foetal,10%;Double résistance,1%- Oui.

2)Conditions de culture: phase gazeuse: air,95%; dioxyde de carbone,5%. température:37℃，L'humidité de l'incubateur est70- 80%- Oui.

3)Liquide de stockage congeléPour:90% desérum,10% DMSO，Actuellement utiliséMaintenantAssorti- Oui.

II.Les cellulestraiterPour:

1)Réanimation des cellules conservées congelées::

Contiendra1 mlLyophilisateur de la suspension cellulaire dans37℃ bain d'eau rapidement secoué pour décongeler, ajouter à contenant4 - 6ml spécialBien mélanger dans le tube de centrifugation du milieu de culture. Dans1000RPMCentrifugation sous conditions3 à 5 minutes, jeter le surnageant, milieu de culture dédié pour remettre en suspension les cellules. La suspension cellulaire est ensuite ajoutée à la6 - 8ml spécialDans un flacon (ou boîte) de milieu de culture37℃ cultiver pendant la nuit. La croissance cellulaire et la densité cellulaire sont observées au microscope le lendemain.

2)Passage cellulaire:SiLes cellulesDensité jusqu'à80% - 90%，à savoirPeut être effectuéeCulture générationnelle- Oui.

Pour le passage de cellules adhérentes, on peut se référer aux méthodes suivantes:

1. AbandonnerCultiver le surnageant, avec sans calciumIons magnésiumdePBSLavage des cellules1-2Une fois- Oui.

2. Adhérer0.25% (w / v) trypsine-0,53 mM EDTAÀEn bouteille de culture(T25bouteille1 à 2 ml,T75bouteille2 à 3 ml) et，Placé dans37℃IncubateurMoyenne digestion1-2minute(les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger correctement le temps de digestion), alorsAprès observation au microscopeDigestion cellulaireLa situation,SiLa plupart des cellules deviennent rondesEt tomber, retour rapide à la table d'opération, tapoterQuelques basAprès culture de la bouteilleAdhérer3 à 4 mlContient10%FBSLe milieu de culture vientcesserdigestion- Oui.

3.Aspirer après avoir battu doucement, dans1000RPMarticleCentrifugation sous pièce3 à 5 minutesRetirer le surnageant, ajouter1 à 2 mlBien souffler après le liquide de culture.Presser la suspension cellulaire1Pour:2Proportion à nouveauT25Dans la bouteille, ajouter6 à 8 mlNouveau milieu dédié configuré selon les exigences de la description pour maintenir la viabilité de croissance des cellules, les passages suivants selon la pratique1: 2 à 1: 5Proportion réalisée- Oui.

3) Gel des cellulesPour:Après réception des cellules recommandé avant la culture3Congeler un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure. Ci - dessousT25Exemples de bouteilles;

1. Les cellulesLorsque congeléselonLe processus de passage cellulaire recueille les cellules bien digérées dans un tube de centrifugation, qui peut être compté à l'aide d'une plaque de comptage des globules pour déterminer la densité de rétention de gel des cellules. La densité de rétention de gel recommandée pour les cellules générales est1×10⁶~ 1×10⁷Une cellule vivantepar ml.

2. 1000rpmCentrifugation3 à 5 minutesEnlever le nettoyage. Remettre en suspension les cellules avec le lyophilisat cellulaire formulé, appuyez sur chaque1 mlLe liquide de congélation contient1×10⁶~ 1×10⁷Une cellule vivantepar mlDistribution dans un lyophilisateur répartit les cellules dans un lyophilisateur, étiqueté avec des informations telles que le nom, l'algèbre, la date, etc.

3. Placer les cellules à geler dans une cassette de refroidissement du programme,-80Degrés réfrigérateur pendant la nuit, après quoi transférer dans un récipient d'azote liquide pour le stockage. La position du bon réservoir de congélation dans le réservoir d'azote liquide est enregistrée simultanément pour une consultation et une utilisation ultérieures.

Précautions:

1. Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses sur le plan biologique et doivent être manipulées à l'intérieur d'un poste de sécurité biologique de niveau 2, avec une attention particulière à la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être éliminés après stérilisation.

2. Il est recommandé de toujours utiliser des gants de protection, des vêtements et de porter un masque de protection lors de la réanimation des cellules conservées congelées. Remarque: l'immersion du lyophilisateur dans l'azote liquide peut fuir et se remplir lentement d'azote liquide. Lors de la décongélation, la transformation de l'azote liquide en phase gazeuse peut provoquer l'explosion du récipient ou le soufflage de son couvercle avec une force dangereuse, créant ainsi des débris volants causant des blessures aux personnes.