Kit ELISA pour tréhalose - 6 - phosphate végétal (t6p)

　　Kit ELISA pour tréhalose - 6 - phosphate végétal (t6p)Mode d'emploi

BS - 8050 - a phytotréhalose - 6 - phosphate (t6p) ELISA Kit 96T

BS - 8050 - B tréhalose - 6 - acide phosphorique végétal (t6p) ELISA Kit 48T

I. principes expérimentaux

Ce kit utilise le test ELISA (double anticorps sandwich method) pour détecter les niveaux de t6p dans les tissus ou les cellules des plantes. Les microplaques sont pré - encapsulées avec des anticorps anti - t6p et, après que le t6p ait été lié à l'anticorps en phase solide dans l'échantillon, des anti - di marqués à la peroxydase de raifort (HRP) sont ajoutés pour former le complexe. Le substrat TMB est ajouté pour le rendu des couleurs, le TMB est converti en bleu sous la catalyse HRP, le jaune après la terminaison de l'acide, la profondeur de rendu des couleurs est positivement corrélée avec la concentration de t6p dans l'échantillon, l'Absorbance est déterminée à la longueur d'onde de 450 nm pour calculer la concentration.

II. Composition du kit

Spécifications des composants conditions de conservation

Pré - emballage séché hermétiquement par microplaque 12 puits × 8 bandes 2 - 8 ℃

Poudre lyophilisée standard - 20 ℃ après remise en solution

Détection de marqueur HRP anticorps liquide à l'abri de la lumière 2 - 8℃

Substrat chromogène (TMB) a liquide + B liquide maintenant adapté, protégé de la lumière

Liquide de terminaison 2m Sulfuric Acid température ambiante

Liquide de lavage concentré 40 ℃ bain d'eau pour dissoudre la cristallisation

Échantillon Xishi liquide avec stabilisant

Remarque: il peut y avoir des différences entre les composants de la marque, voir les instructions spécifiques pour plus de détails.

Iii. Traitement des échantillons

1. Types d'échantillons

Tissu végétal: peser 0,1 g de tissu, ajouter 1 mL d'homogénat de bain de glace de liquide d'extraction et centrifuger pour enlever le nettoyage.

Cellules / bactéries: la collecte est décantée après centrifugation et les cellules brisées par ultrasons extraient le surnageant.

2. Conditions de conservation

Court terme: 2 - 8 ℃ Conservation ≤ 48 heures.

Long terme: - 20 ℃ Gel - stockage après la distribution, éviter la congélation répétée et la dégel.

3. Recommandations de dilution

Échantillons conventionnels: une dilution de 5 à 20 fois est recommandée (par exemple, prendre 20 μl d’échantillon + 180 μl de dilution).

Échantillons à haute concentration: une pré - expérience est nécessaire pour déterminer le multiple de dilution, jusqu'à une dilution de 100 000 fois (méthode de dilution en trois étapes).

Iv. Étapes opérationnelles

Formulation de produits standard

Les étalons lyophilisés sont redissous avec 1 ml de diluant et laissés 10 minutes après mélange.

Effectuer une série de dilutions (par exemple 8 PMOL / l → 4 PMOL / l → … → 0,5 PMOL / l).

Ajout

Puits Standard: 50 μl / puits.

Puits d'échantillon: ajouter d'abord 40 μl de dilution, puis 10 μl d'échantillon (dilution totale 5 fois).

Trous blancs: sans échantillon et sans résistance.

Incubation

Incuber 120 minutes à 37°c et laver les plaques 3 fois (1 minute par trempage).

Rendu des couleurs et terminaison

100 µl de solution chromogène TMB par puits, incuber à 37 ° C à l'abri de la lumière pendant 15 minutes.

L'addition de 50 µl de liquide de terminaison termine la réaction et la valeur de do est mesurée en 30 minutes.

V. précautions

Éviter les échantillons: échantillons contenant de l'azide de sodium (nan3) (inhibition de l'activité HRP).

Équilibrage des réactifs: utilisez l'équilibre de la température de la Chambre avant pendant 20 minutes, le liquide de lavage concentré nécessite un bain - Marie de 40 ° C pour dissoudre la cristallisation.

Contrôle de la qualité: il est recommandé d'installer des pores poreux, la courbe standard r² doit être ≥ 0,95.

Vi. Analyse des résultats

Courbe Standard: une équation à quatre paramètres est tracée pour la concentration en valeurs od.

Calcul de la concentration: la valeur od de l'échantillon est substituée à l'équation de la courbe et multipliée par le multiple de dilution.

Remarque: ce qui précède est à titre indicatif seulement et n'est pas considéré comme des données réelles, l'expérience doit suivre strictement les instructions ou consulter l'enseignant technique.

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