(Experimental services) PCR quantitative par fluorescence en temps réel

1. Aperçu des services

(Experimental services) PCR quantitative par fluorescence en temps réel(quantitative real time PCR, QPCR) fait référence à une méthode d'incorporation de groupes fluorescents dans un système réactionnel d'amplification PCR, de surveillance en temps réel de l'ensemble du processus PCR à l'aide de l'accumulation de signaux fluorescents et, enfin, d'analyse quantitative de gabarits inconnus à l'aide de courbes standard. En tant que technologie « étalon - or» dans la recherche en biologie moléculaire, la QPCR est devenue un outil pour l'analyse de l'expression des gènes, la détection des agents pathogènes et la recherche sur les variations génétiques grâce à sa sensibilité, sa spécificité et sa précision.

Nous nous appuyons sur la plate - forme d'inspection PCR pour fournir desExtraction d'acides nucléiques d'échantillons, transcription inverse, amplification QPCR à l'analyse de donnéesService technique à guichet unique. Que vous ayez besoin de tester le niveau d'expression de l'ARNm, du MIRNA, de l'lncrna ou d'effectuer une analyse de variation du nombre de copies d'ADN (CNV), nous pouvons vous fournir des données de haute qualité qui répondent aux normes.

2 Principes et méthodes techniques

Nous proposons deux stratégies de détection grand public qui répondent à différents besoins expérimentaux:

• Méthode de teinture sybr Green I:

• Principe:Les colorants sybr Green I se lient spécifiquement à de petits sillons d'ADN double brin, combinés à un signal post - Fluorescent renforcé. Avec l'augmentation des produits de PCR, le signal de fluorescence est augmenté de manière synchrone.

• Applicable:Criblage primaire différentiel d'expression génique, détection d'échantillons à grande échelle, projets sensibles aux coûts. Nous collaborons avec l'analyse de la courbe de fusion (Melt Curve) pour assurer l'unicité du produit amplifié.

• Méthode de la sonde Taqman:

• Principe:On utilise des sondes spécifiques conçues pour la séquence cible (marqueur du Groupe Rapporteur de fluorescence à l'extrémité 5 'et du Groupe de trempe à l'extrémité 3'). La sonde est intacte sans Fluorescence et l'action hydrolytique de l'enzyme Taq au cours de l'amplification coupe le Groupe Fluorescent pour émettre de la fluorescence.

• Applicable:Une spécificité élevée nécessite des expériences, des tests PCR multiples (Multiplex PCR), le typage SNP, la détection de micro - échantillons.

3. Contenu du service et processus complet

Nous suivons strictement les procédures d'exploitation normalisées (SOP) pour assurer une précision contrôlable à chaque étape:

Phase 1: conception expérimentale et optimisation

• Conception des amorces / sondes:Concevoir des amorces transintroniques pour le gène cible (target gene) afin d'éviter les interférences avec la contamination de l'ADN génomique; Dépistage des gènes de ginseng interne (housekeeping gene, tels que GAPDH, actb, arnr 18s, etc.).

• Validation pré - expérimentale:La spécificité des amorces est vérifiée par PCR ordinaire et électrophorèse sur gel d'agarose pour optimiser la température de recuit.

Phase 2: traitement des échantillons

• Extraction des acides nucléiques:Pour différents types d'échantillons (cellules, tissus, sang, exosomes, etc.), des kits spéciaux sont utilisés pour extraire de l'ARN ou de l'ADN total de haute qualité, effectuer des tests de concentration et de pureté (od260 / 280) et évaluer l'intégrité.

• Transcription inverse (synthèse d'adnc):Utilisation d'oligo (dt) ou d'amorces aléatoires contre l'ARNm; L'utilisation d'amorces tige - boucle ou d'une méthode d'addition de queue contre le MIRNA assure une efficacité de transcription inverse homogène.

Phase 3: détection en vol

• Construction du système:Configurez le système de réaction QPCR haute fidélité, définissez au moins 3 répétitions techniques (triplicates), éliminez les erreurs d'addition.

• Fonctionnement du programme:Le signal de fluorescence est acquis en temps réel, générant une courbe d'amplification.

Phase 4: analyse des données

• Relativement quantitative:adopter2- le -ΔΔCtLa méthode a calculé les différences d'expression génique entre le Groupe expérimental et le groupe témoin fold change.

  
  

• Quantitativement:Construisez des étalons plasmidiques, tracez des courbes standard et calculez le nombre exact de copies du gène cible dans votre échantillon.

  
  

4. Nos principaux avantages

1. Plate - forme matérielle:PCR quantitative mainstream, la différence entre les pores est minime et la stabilité des données est élevée.

2. Système strict de contrôle de qualité:Suivre l'International MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments） Le Guide. L'efficacité d'amplification (90% - 110%) et la relation linéaire (r² > 0,99) sont strictement surveillées pour éliminer les faux positifs / faux négatifs.

3. Traitement complexe des échantillons:Une vaste expérience dans le traitement des coupes ffpe, des micro - tissus, des exosomes et des échantillons de sang total pour éliminer efficacement les inhibiteurs de PCR.

4. Livraison de données professionnelles:Fournit non seulement les valeurs brutes de CT, mais également les courbes d'amplification, les courbes de fusion, les histogrammes de volume d'expression relative / thermogrammes et génère un rapport complet contenant des matériaux et des méthodes expérimentales détaillés qui répondent directement aux exigences de publication Sci.

5. Scénarios d'application

• Analyse des niveaux d'expression génique:Validation de l'expression différentielle des ARNm, lncrna, circrna sous différentes conditions de traitement ou modèles de maladies (validation QPCR après ARN - SEQ).

• Détection de MIRNA:Etude de la régulation de l'expression de minuscules ARN.

• Variation du nombre de copies d'ADN (CNV):Détection d'amplification ou de délétion de gènes tumoraux, identification du nombre de copies transgéniques.

• Vérification du typage SNP:Identification génotypique de sites polymorphes mononucléotidiques.

• Détection de microorganismes pathogènes:Détermination de la charge virale, analyse quantitative qualitative des bactéries.

• ChIP-qPCR :Vérification de l'enrichissement en fragments d'ADN après immunoprécipitation de la chromatine, étude des interactions protéine - ADN.

6. Exigences d'envoi d'échantillons et normes de livraison

• Suggestions d'envoi d'échantillons:

• Les cellules: Précipitation cellulaire >

• 1 * 10 ^ 6， Gel rapide après nettoyage PBS.

• Organisation:Tissus animaux > 50mg, tissus végétaux > 100mg, azote liquide surgelé ou rnalater conservé

• Le sang:Le sang total nécessite un traitement anticoagulant ou fournit directement du sérum / plasma bien isolé.

• ARN/ADN :Concentration > 50 ng / μl, quantité totale > 1 μg, transport de glace carbonique.

• Contenu de la livraison:Rapport d'expérience complet (avec étapes expérimentales, informations sur les réactifs), fichier de données brutes (.Eds /.Xls), graphique des résultats de l'analyse des données (tableaux statistiques Excel et images HD).