Polyéthylèneimine linéaire de grade transfectant (mw25000)

Polyéthylèneimine linéaire de grade transfectant (MW25000), est un produit réactif de transfection instantanée à base de polyéthylèneimine avec un effet de transfection élevé. Le polyéthylèneimine est un polymère macromoléculaire organique à haute charge cationique qui se lie facilement aux molécules d'acide nucléique chargées négativement pour former un complexe chargé positivement. Le complexe se lie aux anions de la surface de la cellule et pénètre dans la cellule par endocytose. Ce réactif de transfection est peu cytotoxique et convient à de nombreuses lignées cellulaires, a été largement utilisé dans les protéines recombinantes,AAVProduction, etc.

1. Configuration des réactifs

Matériel nécessaire:

Eau désionisée ou de qualité biologique supérieure,12 mol/LAcide chlorhydrique (HCl),10 mol/L* (du NaOH), jetable0,1 ~ 0,2μm PESFiltre stérile sous vide, stérileHDPEOu bouteilles de stockage en polypropylène.

Configuration du liquide de stockage:

1) Le Sera1 grammePolyéthylèneimine linéaire de grade transfectant25 000Dissous dans900 mLEau désionisée, agitation latérale (peut être chauffée à60 à 80℃) côté goutte à goutte12 MAcide chlorhydrique, ajusté àLe pH<2.0, remuer3Plus d'heures jusqu'à dissolution;

2. 2. Utiliser10 M* ajustementLe pHà6,9 à 7,1;

3. Le Transférer la solution dans le cylindre doseur (ou tasse doseuse)À l'intérieur, ajouter de l'eauCapacité à1 L;

4. 4. Avec jetable0.2 µmFiltre filtration sous vide pour l'élimination des bactéries, i.e.1 mg/mLLe liquide de stockage;

Le 5 Peut être divisé en liquide de stockage selon les besoins, stocké dans-20℃ peut être sauvé1Année; Le liquide de stockage ne peut pas être congelé après reconstitution.

2. Processus opérationnel de transfection

Inoculation des cellules: pour améliorer l'efficacité de la transfection, il est recommandé d'inoculer les cellules la veille de la transfection afin d'obtenir une densité cellulaire au moment de la transfection.Dans70 ~ 80%Pour approprié;

préparerADN- réactifs de transfectionLe complexe:

1) Le SeraADN, le réactif de transfection et le diluant sont d'abord ramenés à la température ambiante;

2. 2. Diluer la bonne quantité avec un milieu approprié sans protéinesADN;

3. Le Selon une certaine proportion(chaque1 μg d'ADNÀ utiliser1 à 5 μLRéactif de transfection, il est recommandé de tâtonner vous - même), le réactif de transfection dilué est ajouté goutte à goutte à la chargeADNTube à essai pour solution(ne pas inverser l'ordre d'ajout), d'un côtéDoucementVortex, bien mélangé, température ambiante au repos10 à 25minuteIncubation- Oui.

Cellules transfectées:

1) Le Lors de la transfection en l'absence de sérum, le milieu cellulaire est éliminé et remplacé par un milieu sans sérum;

2. 2. Incorporer la bonne quantité dans les cellulesADN- réactifs de transfectionComplexe, mélanger doucement, transfection6 à 8Après l'heure, remplacer le milieu fraîchement préchauffé;

3. Le Dans37℃Et,5 % de CO₂IncubateurcentreCulture, après transfection24heureL'expression du gène transféré peut être détectée (le temps de détection approprié peut être déterminé par vous - même).

Conditions de transport et de stockage

Conditions de transport: transport à température ambiante

Condition de conservation: poudre à température ambiante ou4℃ conservation, date d'expiration2Années.

Précautions

1. Pour la plupart des cellules, chaque1 μg d'ADNutiliser3 μLLes réactifs de transfection peuvent obtenir une efficacité de transfection plus élevée, vous pouvez également essayer chaque1 μg d'ADNutiliser1,5 à 4 μLLes réactifs de transfection sont optimisés.

2. Pour votre sécurité et votre santé, portez une combinaison expérimentale et manipulez - la avec des gants jetables.

3. Ce produit est destiné uniquement à un usage scientifique.