pU6-Ets2(souris)-sgARN2-Cas9-EGFP

PrÉcautions: Veuillez trouver exactement le nom de l'antibiotique correspondant à ce plasmide, la concentration d'utilisation de l'antibiotique, le nom de l'état sensitif et la température de culture avant la transformation.

1, après avoir reçu la poudre sèche de plasmide, veuillez d'abord5000rpmCentrifugation1 minute, adhérer à nouveau20 μl à 50 μlEau stérile oupH 8,0de1 * TETampon pour dissoudre le plasmide, placé à température ambiante1 minute;

2, à partir de-80℃Retirer l'état sensoriel correspondant dans le réfrigérateur, mettre sur la boîte à glace pour décongeler et bien marquer;

3、 取2 μlPlasmide ajouté à100 μlDans l'état ressenti, bain de glace30 minutes;

4Et,42℃Le stress thermiqueannées 90Le bain de glace2 minutes;

5, adhérer900 μlSans résistanceLBMilieu de culture liquide,180 tr/minCulture par commotion45 minutes;

6Et,6000rpmCentrifugation5 minutes, ne reste que100ulPrécipitation des bactéries mélangées surnageantes;

7Liquide bactérien après mélange ajouté à la résistance correspondanteLBSur la plaque, versez la bonne quantité de perles de verre, appliquez bien le liquide;

8Cultiver la plaque vers l'avant1 heureCulture à nouveau inversée12h~16h;

9Sélection des colonies monoclonales jusqu'à la résistance correspondanteLBEn milieu liquide, culture par commotion12h~16h, extraction des plasmides selon les besoins expérimentaux