Marque de cellules épithéliales alvéolaires humaines de type II

Cellules épithéliales du tube de popularité

I. propriétés fondamentales des cellules

Milieu de culture: avec FBS, additifs de croissance, Penicillin, streptomycine, etc.

Fréquence de changement de liquide: tous les 2 - 3 jours

Caractéristiques de la génération: transmissible 2 - 3 générations

Suc digestif: 0,25% de leucose pancréatique

Conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2，5%

Introduction aux cellules: les cellules épithéliales des tubes de popularité sont isolées du tissu trachéal; Trachée (trachea), partie des organes respiratoires; Tubulaire de type cylindre dont la paroi arrière est légèrement plane. L'extrémité supérieure aplatit le bord inférieur de la sixième Vertèbre cervicale, lié au cartilage annulaire; Descendez jusqu'à la jonction des quatrième et cinquième vertèbres thoraciques (plutôt le plan angulaire du sternum) et divisez les bronches principales gauche et droite, la fourche est appelée la fourche trachéale. La trachée est principalement constituée de 14 à 16 cartilages semi - annulaires, élastiques, le cartilage étant un anneau cartilagineux en forme de Glyphe « C », entaillé vers l’arrière, chaque anneau cartilagineux étant relié par un ligament, et le muscle lisse et le tissu conjonctif dense au niveau de l’entaille arrière de l’anneau, maintenu dans un état d’ouverture constante. La lumière est doublée d'une muqueuse dont la surface recouvre l'épithélium ciliaire, le mucus sécrété par la muqueuse peut adhérer aux particules de poussière de l'air aspiré, et les cils balancent constamment vers le pharynx pour expulser le mucus et la poussière afin de purifier le gaz aspiré. L'épithélium trachéal est la première ligne de défense des voies respiratoires pour le contact avec l'environnement extérieur, non seulement en tant que cellules cibles agissant sur divers agents pathogènes, médiateurs inflammatoires, mais également en tant que synthèse cellulaire effectrice, libérant de nombreux médiateurs inflammatoires et Cytokines, participant ainsi à l'inflammation des voies respiratoires et à la Réponse immunitaire. Les Cytokines épithéliales trachéales primaires cultivées in vitro présentent de grandes similitudes avec les tissus in vivo en termes de structure morphologique et d'activité fonctionnelle et sont donc extrêmement importantes dans la recherche fondamentale et clinique.

Idées pour la culture isolée de cellules primaires:

Extraction - - séparation - - culture - - identification

Tout d'abord, le tissu est retiré de l'organisme, après traitement par la Dan leucoase pancréatique / collagénase, dispersé en cellules uniques, puis cultivé dans un milieu approprié, permettant aux cellules de se multiplier jusqu'à un certain coefficient après identification cellulaire.

Étapes expérimentales:

I. prélever des rats SD mâles 7 - 10D, sacrifiés par dislocation de la colonne cervicale et stérilisés par immersion dans de l'éthanol à 75% pendant 3 - 5 min.

II. Dans le plan de travail ultra - net, la tête de guillotine du rat est placée dans une boîte de pétri en verre, le cerveau entier est retiré après l'ouverture de la cavité crânienne et placé dans une boîte de pétri PBS prérefroidie, le cervelet et le mésocerveau sont enlevés.

Iii. Rouler lentement les hémisphères cérébraux sur du papier filtre sec pour éliminer les méninges molles et les gros vaisseaux cérébraux, puis les placer dans de nouvelles boîtes de pétri PBS prérefroidies.

Iv. Utilisez des pinces anatomiques fines pour éliminer la substance blanche du cerveau, les gros vaisseaux sanguins résiduels et les méninges molles, en préservant le cortex cérébral.

V. le cortex cérébral est placé dans le dmem, cisaillé en taille d'environ 1 mm3, mis dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter le liquide enzymatique mixte I (0,05 - 0,1% collagénase de type II, 0025 - 0,05% collagénase de type IV, 200 - 400u dnasei), mélanger après 37 ℃ digestion au bain d'eau 1 - 1,5 H.

Centrifuger à température ambiante 1 000 × g pendant 8 minutes, enlever le surnageant.

Vii. Ajouter 20% de BSA en suspension lourde dans le précipité, bien mélanger, 1 000 × G, 20 min, 4 ℃ centrifuger, enlever.

VIII, le précipité est ajouté à 4 ml de liquide enzymatique mixte II (0,05 - 0,1% collagénase / dispersase, 0,05 - 0,1% collagénase de type I, 100 - 300 u dnasei) remis en suspension, malaxé, digéré au bain - Marie à 37 ° C pendant 0,5 - 1 h, centrifugé à 700 × G température ambiante pendant 6 min, désulfuré.

IX, le précipité est mélangé par ajout de 2 ml de suspension de culture dmem, étalé sur 12 ml de percoll 50% (25 000 x G, 60 min, 4°C) qui forme un gradient continu par centrifugation, 1000 x G, 4°C par centrifugation pendant 10 min.

X. la couche jaune - blanc au - dessus de la couche de globules rouges près du fond est un segment microvasculaire purifié, après aspiration et deux rinçages dmem (centrifugation 1000 x RPM, 6 min, température ambiante), le surnageant est éliminé.

La solution de culture dmem (20% FBS, 4 µg / ml de protéine) est remise en suspension, ensemencée dans une boîte de culture cellulaire préparée contenant 5% de sérum de rat incubée à 37°c pendant une nuit, le milieu mixte sans protéine est remplacé après 24 H de repos dans un incubateur 37°c, 5% CO 2, suivi d'un changement de solution tous les jours.

Précautions:

1. La culture peut être conservée pendant 3 - 6 mois à 4 ℃.

2. Pendant la culture cellulaire, veuillez prendre soin de maintenir l'opération stérile.

3. Au cours de la culture de passage, le temps de digestion de l'enzyme Yi ne doit pas être trop long, sinon il affectera la paroi cellulaire et son état de croissance.

4. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules par multiple pendant les 3 premiers jours suivant la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication avec le Département technique; En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter rapidement pour nous informer de manière exhaustive des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent les suivre, les revoir jusqu'à ce que le problème soit résolu.

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