Activité lactate déshydrogénase (méthode wst - 8) microméthode instructions

Lactate déshydrogénase (LDH) Principe de détermination par microméthode active instructionsEst par détectionLDHDans le processus de réduction catalytique du pyruvate en acide lactiqueNADHQuantité générée pour déterminer indirectementLDHL'activité.

Le processus spécifique est le suivant:

Principe de réaction:DansLDHSous l'effet de,NAD+Généré par restoreNADH- Oui.NADHetWST-8L'interaction produit une couleur et donc une détermination colorimétrique (λmax = 450 nm)).

Conditions de réaction:LDHSeraNADRestaurer àNADH,NADHetWST-8L'interaction produit des couleurs. Cette réaction est effectuée à l'abri de la lumière sur la glace, les composants (tels queTampon d'essaiEt,lactateEt,NADEt,WST-8Et,Améliorateur), doit être retiré du réfrigérateur et équilibré à la température ambiante avant l'expérience, l'ensemble du processus doit être protégé de la lumière.

Mesure d'Absorbance:Dans450 nmMesure de l'Absorbance à la longueur d'onde, Absorbance avecLDHL'activité est proportionnelle et peut être déterminée par colorimétrieLDHActivité.

Étapes expérimentales et équipement requis:

Étapes expérimentales:Liquide de préparation (1×Tampon d'essaiEt,NADEt,WST-8Et,AméliorateuretlactateBien mélanger), ajouter le liquide de travail96Dans une plaque d'orifice ou un microverre, ajouter l'échantillon à tester,37℃ l'Absorbance est mesurée après une certaine période d'incubation à température constante.

Équipement requis:Jauge enzymatique ou spectrophotomètre visible (mesure de l'énergie)450 nmAbsorbance à l'endroit), incubateur, machine à glace, centrifugeuse cryogénique,96Plaque à orifices ou microverre, pistolet à pipette réglable et tête de pistolet, eau désionisée, homogénateur (si échantillon de tissu).

Note expérimentale‌:

Préservation des réactifs:Les groupes (tels queTampon d'essaiEt,lactateEt,NADEt,WST-8Et,Améliorateur), doit être conservé sur la glace à l'abri de la lumière et éviter le gel et la dégel répétés.

Lactate déshydrogénase (LDH) Instructions pour la microméthode activeNotes opérationnelles:L'ensemble du processus expérimental doit être effectué à l'abri de la lumière sur la glace, afin d'éviter que la lumière n'affecte les résultats‌.

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