Kit de détection de l'activité des inhibiteurs de la butyrylcholestérase *

Kit de détection de l'activité des inhibiteurs de la butyrylcholestérase * instructions

Spectrophotométrie visible

Numéro de fret:BC5980

Spécifications:50T/48S

Composition du produit: Veuillez vérifier soigneusement si le volume de réactif correspond au volume contenu dans la bouteille avant utilisation, en cas de doute, veuillez contacter le personnel de solebao à temps.

Formulation de la solution:

1. Réactif un: prenez 1 morceau de réactif un avant utilisation, ajoutez1,8 mlEau distillée, bien dissoute, avec des réactifs incomplets-20℃Peut être conservé après le fractionnement4Semaines, éviter la congélation - dégel répétée (ce réactif est un réactif lyophilisé, il peut y avoir un phénomène de grande ou même très peu de différence de quantité de réactif observé à l'œil nu entre les différents flacons, ce phénomène n'affecte pas l'utilisation, la qualité réelle est la même).

2. Réactif IV: ajouter 17ml de réactif II avant l'utilisation provisoire, bien dissoudre, utiliser le réactif incomplet-20℃Préservation divisible4Semaines, évitez le gel et la dégel répétés.

3. Réactif V: 10 mmol / L de solution de livansmine. Prendre 15 µl d'une solution de livanse à 10 mmol / l avant utilisation provisoire, ajouter 985μLEau distillée, formulée pour0.15Mmol / L de solution de livansmine, est maintenant utilisé (ce réactif est utilisé dans les expériences de tube positif, sélectionnées pour faire).

Description du produit:

Butyrylcholinesterase (butyrylcholinesterase,BchE,EC3.1.1.8), également connu sous le nom de cholestérase plasmatique *, pseudocholestérase *, est une hydrolase acide filamenteuse * qui pénètre dans le sang après avoir été synthétisée par le foie et est présente dans presque tous les tissus animaux. Avec acétylcholestérase (AchE), en comparaison,BchECapable d'hydrolyser efficacement de plus grands esters biliaires *, tels que la butyrylbiliaire * et la benzoylbiliaire *, et peut éliminer les effets toxiques des agents neurotoxiques tels que les pesticides organophosphorés, les pesticides carbamates et autres. Des études ont montré,BchEPeut être une cible importante dans le traitement de la maladie d'Alzheimer,BchELes inhibiteurs sont utilisés pour améliorer les signes tels que la perte de mémoire, le dysfonctionnement cognitif, etc. chez les personnes atteintes de la maladie d'Alzheimer.

Bche catalyse l'hydrolyse de la butyrylbilie * pour produire de la bile *, de la bile * par action de l'acide dithionitrobenzoïque (dtnb)5 -Mercapto-Acide nitrobenzoïque (TNB),BchEInhibiteurs par inhibitionBchEActivité, réduit l'hydrolyse de la butyrylbilie *.TNBDans412 nmIl y a un pic d'absorption, qui peut être déterminé par412 nmVariation de l'Absorbance au niveau, l'activité inhibitrice de bche est calculée.

Remarque: Avant l'expérience, il est recommandé de sélectionner 2 à 3 échantillons avec de grandes différences attendues pour la pré - expérience.

Instruments et fournitures à apporter:

Spectrophotomètre visible, balance, four, broyeur / mortier/Homogénateur,30 à 50Tamis à mailles, Nettoyeur à ultrasons, centrifugeuse, bain - Marie/Incubateur à température constante,1 mlVerrerie, pistolet à pipette réglable, glace et eau distillée.

Étapes opérationnelles: voir le document « données produit » pour les étapes opérationnelles spécifiques

Précautions:

1. Pour garantir la précision et la stabilité des résultats expérimentaux, veuillez contrôler strictement le temps de réaction et le temps de fonctionnement.

2. Absorbance de l'échantillon a '_{Détermination}Supérieure à 1,5 ouΔA_{Détermination}procheΔA_videLors de l'étape de traitement de l'échantillon, il est recommandé d'augmenter la proportion de l'échantillon de tissu ou de formuler l'échantillon de poudre dans une solution plus concentrée pour la détermination ultérieure. quandΔA_{Détermination}Moins de 0,01, l'échantillon peut être dilué avec l'extrait avant d'être déterminé.

Pour comparer le degré d'inhibition de bche par différents réactifs, extraits, médicaments ou tissus, les réactifs, extraits, médicaments ou homogénats de tissus doivent être formulés à la même concentration pour comparaison.

Exemples expérimentaux:

1. Prenez un échantillon de pelure de pomelo 01005g (séché au four), ajoutez1 mlLe liquide d'extraction pour l'extraction par ultrasons, après centrifugation pour enlever le nettoyage, suivez les étapes de détermination, avec1 mlMesure de la boîte de verre colorimétrique calculé:ΔA_vide= (A»_{Blanc 1}- A_{Blanc 1}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (1372 - 0205) et-（0166 - 0112) et= 1.113,ΔA_{Détermination}= (A»_{Détermination}- A_{Détermination}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (1117 - 0485) et-（0166 - 0112) et= 0578Calcul du taux d'inhibition:

Taux d'inhibition des inhibiteurs bche (% de) et=（1133 - 0578) et÷ 1133 × 100% = 48068%- Oui.

2. Prenez 01014g d'échantillon de peau de kaki (séché), ajoutez1 mlLe liquide d'extraction pour l'extraction par ultrasons, après la centrifugation pour le nettoyage, la dilution16Après le doublement, suivez la procédure de détermination, avec1 mlMesure de la boîte de verre colorimétrique calculé:ΔA_vide= (A»_{Blanc 1}- A_{Blanc 1}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (1372 - 0205) et-（0166 - 0112) et= 1.113,ΔA_{Détermination}= (A»_{Détermination}- A_{Détermination}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (0706 - 0149) et-（0166 - 0112) et= 0503Calcul du taux d'inhibition:

Taux d'inhibition des inhibiteurs bche (% de) et=（1133 - 0503) et÷ 1133 × 100% = 54807%- Oui.

3. Prenez 50 UL de solution de livanse 0,15 mmol / L, suivez les étapes de dosage, utilisez1 mlMesure de la boîte de verre colorimétrique calculé:ΔA_vide= (A»_{Blanc 1}- A_{Blanc 1}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (1372 - 0205) et-（0166 - 0112) et= 1.113,ΔA_{Détermination}= (A»_{Détermination}- A_{Détermination}) - (A»_{Blanc 2}- A_{Blanc 2}) = (0838 - 0171) et-（0166 - 0112) et= 0613Calcul du taux d'inhibition:

Taux d'inhibition des inhibiteurs bche (% de) et=（1133 - 0613) et÷ 1133 × 100% = 44924%- Oui.

Références:

[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. Une détermination colorimétrique nouvelle et rapide de l'activité de l'acétylcholinestérase [J]. Pharmacologie biochimique, 1961, 7(2): 88-95.

[2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Cheikha S Al Neyadi. Découverte de nouveaux inhibiteurs de la butyrylcholinestérase via le dépistage virtuel basé sur la structure [J]. Journal de l'inhibition des enzymes et de la chimie médicale, 2019, 34(1): 1373-1379.

[3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Inhibiteurs hautement puissants et sélectifs de la butyrylcholinestérase pour l'amélioration cognitive et la neuroprotection [J]. Journal de chimie médicale, 2021, 64(10): 6856-6876.

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