Kit de détection de l'activité de l'amidon synthase à l'état conjugué micromethod

Kit de détection de l'activité de l'amidon synthase à l'état conjugué micromethod

Remarque: toujours prendre avant la détermination officielle2 - 3Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictions.

Référence：BC3295

Spécifications:100T/96S

Contenu du produit:

Liquide d'extractionPour:Liquide 100 ml × 1 flacon, conservé à 4 ° C;

Réactif I: flacon de 30 ml x 1, conservé à 4°C;

Réactif II: poudre x 1 flacon, conservée à 4°C;

Réactif III: poudre x 1 flacon, - 20°C de conservation;

Réactif IV: poudre x 2 flacons, conservée à 4°C; Ajouter 5 ml de réactif avant l'utilisation provisoire, bien mélanger et laisser;

Réactif V: poudre x 1 flacon, conservée à 4°C; Ajouter 10 ml de réactif avant l'utilisation provisoire une fois bien mélangé pour la réserve;

Réactif VI: poudre x 1 branche, - 20°C de conservation; Ajouter 500 μl de double vapeur d'eau avant utilisation, dissoudre suffisamment pour la réserve;

Réactif VII: liquide 250 µl x 2 branches, - 20°C de conservation;

Réactif VIII: liquide 12,5 µl x 2 branches; Ajouter 4 ml de réactif IV dissous avant utilisation.

Liquide de réactionⅠFormulation:Ajouter 14 ml de réactif I dans le réactif II avant utilisation, chauffer lentement, chauffer progressivement pour le dissoudre, après refroidissement, ajouter le réactif III mélange pour dissoudre. Cela peut être formulé en deux lots et déterminé.

Description du produit:

Le gbss (EC 2.4.1.21), présent dans l'amidon à l'état lié, catalyse la réaction d'allongement de la chaîne amylacée et est principalement responsable de la synthèse de l'amylose.

Gbss catalyse la réaction de l'adpg avec l'amorce d'amidon (Dextrane) pour transférer les molécules de glucose sur l'amorce d'amidon tout en produisant de l'ADP; Catalyser en outre le NADP successivement par la pyruvate kinase, l'Hexokinase et la 6 - Phosphoglucose déshydrogénase ajoutées au système réactionnel^{Le +}La réduction en NADPH, où la production de NADPH est directement proportionnelle à la quantité d'ADP générée par la réaction de l'étape précédente, permet de calculer l'activité gbss en déterminant la quantité croissante de NADPH à 340 nm.

Instruments et fournitures à apporter:

Spectrophotomètre UV / étalon enzymatique, bain - Marie, centrifugeuse de table, pipette réglable, cuve microquartz / plaque 96 puits (plaque UV), mortier, glace et eau distillée.

Étapes opérationnelles:

I. préparation de liquide enzymatique brut

Peser environ 0,1 g de tissu dans 1 mL d'extrait, homogénat dans un bain de glace. 10000g ， Centrifuger à 4 ℃ pendant 10 min, retirer le surnageant, ajouter 1 mL d'extrait dans le précipité bien mélanger, mettre sur la glace à mesurer.

II. Étapes de détermination

1, le spectrophotomètre ou l'étalon enzymatique est préchauffé pendant plus de 30 min, ajuste la longueur d'onde de 340 nm, l'eau distillée est mise à zéro.

2, ajouter les réactifs suivants dans le tube EP dans l'ordre

Transférez 200 µl de traces de quartz dans une boîte colorimétrique ou une plaque 96 puits immédiatement après le malaxage, enregistrez l'Absorbance initiale A1 à la longueur d'onde de 340 nm et l'Absorbance A2 après 2 min, calculez Δa = A2 - A1.

Attention:Réactif deux s'il y a un précipité, ajoutez - le avant de bien le dissoudre et mélanger.

Trois,GBSSCalcul d'activité

a.La formule de calcul, déterminée à l'aide d'une boîte colorimétrique à traces de quartz, est la suivante:

1, calculé par la concentration de protéine d'échantillon:

Définition de l'unité: la production catalytique de 1 nmol de NADPH par minute par mg de protéines tissulaires dans 1 ml de système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

Activité du gbss (U / mg prot) = [Δa ÷ (εxd) × V mesuré] ÷ (CPR × V - like ÷ V - anti - total × V - up) ÷ t = 432 × Δa ÷ CPR

Cette méthode nécessite une auto - détermination de la concentration en protéines de l'échantillon.

2, calculé selon le poids frais de l'échantillon

Définition de l'unité: la production catalytique de 1 nmol de NADPH par minute par g de tissu dans 1 ml de système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

Activité gbss (U / g poids frais) = [Δa ÷ (ε × d) × V - mesure × 10⁹] ÷ (W ÷ V extrait × V échantillon ÷ V total inverse × V éclairci) ÷ t = 432 × Δa ÷ W.

V mesure: volume mesuré, 0,26 M L; V - échantillon: volume d'échantillon ajouté, 0,1 m l; V total inverse: volume réactionnel, 0,31 ml; v surnageant: volume de surnageant ajouté, 0,15 ml; v Extrait: volume de liquide d'extraction ajouté, 1 x 10^-3L; ε: coefficient d'extinction molaire NADPH, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； D: diamètre de la boîte colorimétrique, 1 cm; t: temps de réaction, 2 min; CPR: concentration protéique de l'échantillon, mg/mL； W: qualité de l'échantillon, g。

b.utiliser96La formule de calcul pour la détermination de la plaque à trous est la suivante:

1, calculé par la concentration de protéine d'échantillon:

Définition de l'unité: la production catalytique de 1 nmol de NADPH par mg de protéines tissulaires par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

Activité gbss (U / mg prot) = [Δa ÷ (εxd) × V mesuré] ÷ (CPR × V - like ÷ V - anti - total × V - up) ÷ t = 720 × Δa ÷ CPR.

Cette méthode nécessite une auto - détermination de la concentration en protéines de l'échantillon.

2, calculé selon le poids frais de l'échantillon

Définition de l'unité: la production catalytique de 1 nmol de NADPH par g de tissu par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

Activité gbss (U / g poids frais) = [Δa ÷ (ε × d) × V mesuré] ÷ (W ÷ V extrait × V échantillon ÷ V anti - total × V éclairci) ÷ t = 720 × Δa ÷ W.

V mesure: volume mesuré, 0,26 M L; V - échantillon: volume d'échantillon ajouté, 0,1 m l; V total inverse: volume réactionnel, 0,31 ml; v surnageant: volume de surnageant ajouté, 0,15 ml; v Extrait: volume de liquide d'extraction ajouté, 1 x 10^-3L; ε: coefficient d'extinction molaire NADPH, 6,22 × 10^-3mL/nmoL/cm； D: diamètre de la boîte colorimétrique, 1 cm; t: temps de réaction, 2 min; CPR: concentration protéique de l'échantillon, mg/mL； W: qualité de l'échantillon, g。

Kit de détection de l'activité de l'amidon synthase à l'état conjugué micromethodInstructions de commande:

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Produits cryogéniques: les produits cryogéniques sont transportés avec des sacs de glace solebao pendant le transport. Emballer le produit dans un sac de glace à l'avance, puis utiliser la boîte en mousse pour sceller, sceller fermement la boîte en mousse avec du ruban adhésif, puis mettre dans la boîte de solebao (l'effet d'isolation thermique peut durer moins d'une semaine), puis livrer à la coopération Express, la livraison sûre, rapide et fiable des mains du client, garantir la nature du produit stable comme un, pour votre escorte expérimentale.
Produits à température normale: il n'est pas nécessaire d'ajouter de la glace ou de l'emballage spécial pendant le transport des produits à température normale. Les produits sont livrés rapidement par le personnel de la salle de dépôt de la société, la livraison express précise et rapide et efficace garantit que les produits arrivent rapidement dans vos mains.