Cassette de test diamine oxydase

Cassette de test diamine oxydaseMéthode des traces

Remarque: 2 - 3 échantillons avec de grandes différences attendues sont sélectionnés pour la prédiction avant la détermination formelle.

Numéro de fret:BC1285

Spécifications:100T/48S

Contenu du produit:

Liquide d'extraction: liquide100mL × 1Les bouteilles,4℃保存。

Réactif 1: liquide0,25 ml × 1Branches,4℃保存。

Réactif II: liquide2mL × 1Le tube,4℃保存。

Réactif III: liquide1mL × 1Le tube,4℃保存。

Description du produit:

DAO(EC1.4.3.6)Il est largement présent chez les animaux (muqueuse intestinale, poumons, foie, reins, etc.), les plantes et les micro - organismes. L'oxydation catalytique des Polyamines en aldéhydes, dont l'activité est étroitement liée à la synthèse des acides nucléiques et des protéines, est capable de refléter l'intégrité et le degré d'endommagement de la barrière mécanique intestinale.

DAOCatalyse la production d'aldéhyde et * par l'amine mortuaire, addition exogène d'un excès de peroxydase de raifort, catalyse * l'oxydation de l'ortho

La diphénylamine produit de l'orthodiphénylamine oxydée, qui est460 nmIl y a un pic d'absorption caractéristique, en déterminant le taux d'augmentation de l'Absorbance à cette longueur d'onde, on calculeDAOActivité.

Fournitures et instruments expérimentaux:

Balance, centrifugeuse cryogénique, spectrophotomètre visible/Marqueur enzymatique, cuvette colorimétrique à traces de quartz/ 96Plaque de puits, eau distillée.

Étapes opérationnelles:

I. extraction enzymatique brute:

1. Organisation: selon la qualité de l'Organisation (g): volume de liquide extrait(mL)Pour1Pour:5 à 10Proportion (recommandé de prendre environ0.1gOrganisation, adhérer1 mlExtrait liquide) pour réaliser un homogénat de bain de glace, puis10000g，4℃ centrifugation20 minutesEnlever, placer sur la glace à mesurer.

2. Bactéries, champignons: par nombre de cellules (10⁴One): volume de liquide extrait (mL) pour500 ~ 1000Pour:1Proportion (recommandé500Million de cellules ajoutées1 mlExtract liquid), bain de glace ultrasons briser les cellules (puissance300w, ultrasons3Secondes, intervalles7Secondes, temps total3 minutes); puis10000g，4℃, centrifugation10 minutesPrendre sur la glace à mesurer.

3. Liquides tels que le sérum: détermination directe.

II. Table d'opération de détermination:

1, Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique30 minutes, régule la longueur d'onde460 nmL'eau distillée est mise à zéro.

2, Table des opérations

Iii. Formule de calcul de l'activité enzymatique:

a.La formule de calcul déterminée à l'aide d'une boîte colorimétrique à traces de quartz est la suivante:

（1) calculé par concentration protéique de l'échantillon:

Définition de l'activité enzymatique: danspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par milligramme de protéine de tissu dans les conditions de ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est d'une unité de viabilité enzymatique (U).

DAOActivité (nmol/min/mg prot) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon× Cpr) et÷T= 18×A 460 ÷Cpr

（2) calculé par la qualité de l'échantillon:

Définition de l'activité enzymatique: danspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par gramme de tissu à ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/g) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon÷VTotal des échantillons× W) et÷T= 18×A 460 ÷W

（3) par nombre de cellules:

Définition de l'activité enzymatique: DanspH 7,2, la température est37Dans la condition de ℃, chaque10⁴Production catalytique de cellules par minute1 nmol de H²O²La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/10⁴cellule) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon÷VTotal des échantillons×Nombre de cellules)÷T = 18×A₄₆₀÷Nombre de cellules

(4)Calculé par volume de liquide

Définition de l'activité enzymatique: DanspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par ml de sérum à ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/mL) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷VL'échantillon÷T = 18×A₄₆₀

ε: coefficient d'extinction millimolaire de l'orthoanilamine oxydée:7,5 L/mmol/cm;d: diamètre optique de la cuve colorimétrique,1 cm;VAnti - Total: antiLe volume total doit être,0,2 ml;VÉchantillon: volume de l'échantillon dans la réaction,0,05 ml;Véchantillon total: volume de liquide d'extraction ajouté,1 ml;CPRPour:

Concentration des protéines de l'échantillon,mg/mL;W: qualité de l'échantillon,g;T: temps de réaction,30 minutes

b.Avec 96 La formule de calcul pour la détermination de la plaque à trous est la suivante:

（1) calculé par concentration protéique de l'échantillon:

Définition de l'activité enzymatique: danspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par milligramme de protéine de tissu dans les conditions de ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est d'une unité de viabilité enzymatique (U).

DAOActivité (nmol/min/mg prot) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon× Cpr) et÷T= 36×A 460 ÷Cpr

（2) calculé par la qualité de l'échantillon:

Définition de l'activité enzymatique: danspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par gramme de tissu à ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/g) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon÷VTotal des échantillons× W) et÷T = 36×A₄₆₀÷W

（3) par nombre de cellules:

Définition de l'activité enzymatique: DanspH 7,2, la température est37Dans la condition de ℃, chaque10⁴Production catalytique de cellules par minute1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/10⁴cellule) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷(VL'échantillon÷VTotal des échantillons×Nombre de cellules)÷T = 36 x A₄₆₀÷Nombre de cellules

(4)Calculé par volume de liquide

Définition de l'activité enzymatique: danspH 7,2, la température est37Produit catalytiquement par minute par ml de sérum à ℃.1 nmol de H₂O₂La quantité d'enzyme requise est définie comme une unité de viabilité enzymatique.

DAOActivité (nmol/min/mL) et= un₄₆₀÷(ε × d) et× VAnti - Total÷VL'échantillon÷T = 36×A₄₆₀

ε: coefficient d'extinction millimolaire de l'orthoanilamine oxydée:7,5 L /mmol/cm;dPour:96 Diamètre optique de la plaque de trou,0,5 cm;VAnti - Total:

Volume total de la réaction,0,2 ml;VÉchantillon: volume de l'échantillon dans la réaction,0,05 ml;Véchantillon total: volume de liquide d'extraction ajouté,1 ml;CPR: concentration protéique de l'échantillon,mg/mL;W: qualité de l'échantillon,g;T: temps de réaction,30 minutes

Précautions:

1, siODValeur inférieure à0.01Augmenter la taille de l'échantillon pour l'extraction;ODValeur supérieure à0.8Le liquide enzymatique brut peut être dilué de manière appropriée ou réduire la taille de l'échantillon pour l'extraction.

2La teneur en protéines de l'échantillon doit être déterminée en outre.

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Produits à très basse température: chargement de glace sèche pendant le transport de produits à très basse température. Enveloppez le produit avec de la glace sèche, puis Scellez la boîte en mousse, la couche de ruban adhésif colle la boîte en mousse, placez - la dans la boîte de solebao, puis livrez - la à la coopération Express, la livraison sûre, rapide et sûre aux mains du client, assurez - vous que la nature du produit est stable comme un, pour votre escorte expérimentale.
Produits cryogéniques: les produits cryogéniques sont transportés avec des sacs de glace solebao pendant le transport. Emballer le produit dans un sac de glace à l'avance, puis utiliser la boîte en mousse pour sceller, sceller fermement la boîte en mousse avec du ruban adhésif, puis mettre dans la boîte de solebao (l'effet d'isolation thermique peut durer moins d'une semaine), puis livrer à la coopération Express, la livraison sûre, rapide et fiable des mains du client, garantir la nature du produit stable comme un, pour votre escorte expérimentale.
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