Test de détection du facteur d'Apoptose caspase - 389

Test de détection du facteur d'Apoptose caspase - 389

Caspase3

CaspaseEst - une famille de protéases qui jouent un rôle important dans le processus d'apoptose. Caspase3, également connu sous le nom de CPP32, est une enzyme clé dans le processus d'apoptose qui peut cisailler procaspase2.6.7 et 9 et peut cisailler directement et spécifiquement de nombreux Substrats de Caspase, y compris PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin Et fodrin, etc. Ces cisaillements de protéines médiés par la Caspase 3 sont une partie importante du mécanisme moléculaire de l'apoptose. La Caspase 3 joue également un rôle clé dans le processus d'apoptose nucléaire, y compris la fixation de la chromatine

Rétrécissement, fragmentation * * de l'ADN, etc. La Caspase 3 joue également un rôle clé dans le bullage cellulaire.

Le principe de détection est basé sur le fait que la casepase 3 peut catalyser le substrat AC - devd - PNA pour produire du PNA jaune (- itroaniline), ce qui permet de détecter l'activité de la casepase 3 par la détermination de l'Absorbance. Le PNA a une forte absorption autour de 405 nm. La courbe standard réalisée en référence au produit jaune PNA peut servir de standard pour quantifier l'activité enzymatique de la Caspase 3.

Caspase-8

La Caspase 8, généralement sous forme d'enzyme, est activée au cours de la transduction du signal de l'apoptose, la Caspase 8 étant considérée comme la Caspase en amont du processus de transduction du signal de l'apoptose et la Caspase 8 étant activée au cours de l'apoptose médiée par FAS - receptor et tnfr - 1, formant Un dimère composé de P18 et P10 qui active en outre la Caspase 4, la Caspase 6 en aval. Caspase 9 et Caspase 10. Cette méthode est basée sur le fait que la Caspase 8 peut catalyser le substrat AC - ietd - PNA pour produire de la PNA jaune (- nitraniline), ce qui permet de détecter l'activité de la Caspase 8 par la détermination de l'Absorbance. Le PNA a une forte absorption autour de 405 nm. La valeur d'od de 405 nm de l'échantillon de détection permet de calculer l'activité enzymatique Caspase 8 de l'échantillon en se référant à la courbe standard réalisée par PNA.

Caspase-9

La Caspase 9, également appelée Ice - lap6 ou mch6, est une celluleApoptoseCaspase en amont pendant la transduction du signal. Après la libération du cytochrome C par les mitochondries, la Caspase 9 peut former un complexe avec le cytochrome C et apaf1 tout en étant activée. La Caspase 9 activée peut activer la Caspase 3, l'enzyme clé de l'apoptose, ce qui favorise la signalisation ultérieure de l'apoptose. L'activation de Caspase 9 peut être régulée par phosphorylation.

Cette méthode, basée sur la Caspase 9, permet de catalyser le substrat AC - lehd - PNA pour produire du PNA (P - Nitroaniline) jaune, qui peut être détecté par la détermination de l'Absorbance.

Activité de Caspase 9. Le PNA a une forte absorption autour de 405 nm. La valeur d'od de 405 nm de l'échantillon de détection permet de calculer l'activité enzymatique Caspase 9 de l'échantillon en se référant à la courbe standard réalisée par PNA.

Caspase1

Caspase2

Caspase4

Caspase6

Facteur d'apoptose Caspase3 / 8 / 9 préparation des échantillons de détection:

1) Échantillons cellulaires: prendre 1x107 cellules (environ 1 Volume cellulaire de flacon de culture de t25), centrifuger 600g 4°C pendant 5 minutes pour recueillir les cellules, aspirer soigneusement le surnageant et laver une fois le PBS. Après avoir aspiré le surnageant, chaque tube d'échantillon cellulaire est additionné de 100 µ | lysat resuspendant le précipité et le bain de glace est lysé pendant 15 minutes. 4 ° C 16000 G centrifuger pendant 10 - 15 minutes, transférer le surnageant dans un tube de centrifugation pré - refroidi avec un bain de glace. L'activité enzymatique de la Caspase 3 est déterminée immédiatement ou l'échantillon est conservé à - 70°c. Dans le même temps, un petit échantillon peut être prélevé pour déterminer la concentration de protéines par la méthode de Bradford, essayez d'atteindre une concentration de protéines de 1 à 3 mg / ML.

2) échantillon de tissu: ajouter 100 µl de lysat pour environ 10 mg de tissu, homogénéiser avec un homogénateur de verre sur un bain de glace. L'homogénat est ensuite transféré dans un tube de centrifugation de 1,5 ML et le bain de glace est lysé pendant 5 minutes supplémentaires. 4 ° C 16000 G centrifuger pendant 10 - 15 minutes, transférer le surnageant dans un tube de centrifugation pré - refroidi avec un bain de glace. Détermination immédiate de l'activité enzymatique de la Caspase 3 ou conservation à - 70°c

L'échantillon. Dans le même temps, un petit échantillon peut être prélevé pour déterminer la concentration de protéines par la méthode de Bradford, essayez d'atteindre une concentration de protéines de 1 à 3 mg / ML.

Courbe standard de détection de l'activité caspase - 3

Cycle expérimental: terminé dans les 7 - 10 jours ouvrables, répéter l'offre de détection.

Note aux clients

1. Anticorps: consultation préalableRecherche ShanghaiBiologique, précise le genre d'anticorps et si cet anticorps peut être utilisé. S'il n'est pas négociable entre les parties, l'offre d'achat du client lui - même ou l'offre de remplacement de notre société;

2. Collecte et conservation des spécimens:

① échantillon de tissu: les tissus frais sont placés dans l'azote liquide ou conservés à 70 degrés, les tissus ne sont pas moins de 100 mg (environ la taille d'un haricot vert);

② cellules cultivées: pas moins de 000000 cellules sont prises dans le tube EP par comptage cellulaire, ajouter 0,5 ml de solution saline physiologique ou de protéine protectrice, mélanger et conserver au réfrigérateur (- 70 ° C, éviter la congélation répétée);

③ Échantillon de cellules sanguines: 0,5 ml de solution saline physiologique ou de protéine protectrice est ajouté après la conservation de l'échantillon de sang dans un tube anticoagulant ou la séparation des cellules dans un isolat lymphocytaire, pour la conservation (- 70 ° C peut être conservé pendant une longue période, éviter les gels et dégel répétés)

④ échantillons de sérum ou de fluide de culture cellulaire: centrifuger pour enlever les impuretés et les retirer dans le tube EP, conserver (au - dessus de 4 ° C peut être conservé pendant 15 - 20 jours, - 70 ° C peut être conservé pendant une longue période, éviter la congélation et la dégel répétés)

3, transport d'échantillon: facultatif l'un des moyens suivants pour envoyer des spécimens

① les échantillons de tissus, les échantillons cellulaires sont transportés dans de la glace sèche ou dans des sacs de glace après l'ajout d'un protecteur de protéines;

② L'échantillon de cellules peut également être envoyé rapidement directement au flacon de culture (le sceau garantit qu'il n'y a pas de pollution, le liquide de culture ne fuit pas, les cellules ne poussent pas trop, environ 50%, remplissez le liquide de culture);

③ le sérum ou le surnageant est envoyé directement avec un sac de glace (le sceau garantit que le liquide ne fuit pas, selon la route, près de 2 - 3 jours peuvent être atteints).

Service expérimental: