Service expérimental quantitatif de marqueurs métaboliques silac

Service expérimental quantitatif de marqueurs métaboliques silac

Introduction aux techniques expérimentales: le principe de base de sil AC est de remplacer les acides aminés correspondants dans le milieu cellulaire par des acides aminés essentiels marqués par des isotopes naturels (légers) ou stables (lourds), respectivement, et après 5 - 6 cycles de multiplication des cellules, les acides aminés marqués par des isotopes stables * sont incorporés dans les protéines nouvellement synthétisées par les cellules pour remplacer les acides aminés originaux. Les protéines lysées des différentes cellules marquées sont mélangées dans des proportions égales en nombre de cellules ou en quantité de protéines, identifiées par spectrométrie de masse après isolement, Purification, quantification relative basée sur la comparaison des aires des deux segments peptidiques isotopiques du spectrogramme de masse primaire. Appartient à la méthode de marquage métabolique in vivo.

Processus opérationnel expérimental:

1, extraction de protéines et préparation d'échantillons

2, test d'efficacité de marquage

3, table de mélange d'échantillons

Classement SDS - Page

5, enzymolyse

6, identification par spectrométrie de masse

7, analyse du logiciel

8, résultats quantitatifs qualitatifs en Protéome

9, extraction de données bioinformatiques et analyse statistique

Note expérimentale:

Le client offre:

1, extrait de protéine: Concentration > 1 μg / µl et quantité totale de protéines > 300 μg.

Cellules: pas moins de 2x106 cellules sont prises dans le tube EP par comptage cellulaire, ajouter 0 5 ml de solution saline physiologique ou protéine protectrice, mélanger et conserver au réfrigérateur (- 80 ° C, éviter la congélation et la dégel répétées).

Normes de livraison:

1, identification des protéines et résultats de l'analyse quantitative sil AC;

2, client signifie DingCarte des pics du spectre de masse correspondant aux protéines;

3, sil AC expérimental étapes expérimentales complètes, l'utilisation de l'instrument, le logiciel pour récupérer les paramètres, etc.

Autres:

1, silac est la technologie de marquage in vivo, les acides aminés marqués isotopiquement stables sont essentiellement les mêmes propriétés chimiques que les acides aminés naturels, les cellules marquées et les cellules non marquées ont peu de différences dans le comportement biologique, l'efficacité de marquage peut atteindre 100%.

2, en utilisant la quantification par spectrométrie de masse, le résultat quantitatif est précis et la variation du lot est petite et bonne répétabilité.

3, marqueur métabolique in vivo combiné avec SDS - page ou technologie de séparation chromatographique, compatible avec les protéines hydrophobes et les protéines métabasiques, non limité par la nature des protéines.

4, plusieurs échantillons sont mélangés après la séparation simultanée, le découpage enzymatique et l'identification, l'impact des expériences ultérieures sur les échantillons est cohérent, réduisant l'impact des opérations expérimentales et de l'équipement d'instrumentation.

5, parce que la technique appartient au marquage in vivo, l'effet de marquage est stable, son efficacité de marquage n'est pas affectée par le lysat, convient non seulement pour effectuer l'analyse des protéines de cellules entières, mais également pour l'identification et la quantification des protéines membranaires.

Par rapport au marquage chimique, les besoins en protéines de la méthode sil AC sont considérablement réduits, généralement seulement quelques dizaines de microgrammes de protéines par échantillon.

7, marque vivante, plus proche de l'état réel de l'échantillon.

8, seulement pour les cellules cultivées vivantes, pour les échantillons de tissus couramment utilisés dans la recherche biomédicale, les échantillons de fluides corporels, etc. ne peuvent pas être analysés, pour les modèles animaux, le coût de marquage est trop élevé pour être atteint. Par rapport à la technologie de marquage in vitro, sil AC appartient au marquage in vivo et présente les avantages techniques suivants:

1, haut débit, peut identifier et quantifier des centaines à des milliers de protéines en même temps;

2, précision quantitative * & True, réduire les différences expérimentales dues à la préparation différente des échantillons;

3. Large gamme de quantification linéaire;

4, sensibilité plus élevée, la quantité nécessaire de protéines est considérablement réduite;

5, le marquage adopte la technologie de marquage in vivo, plus proche de l'état réel de l'échantillon.

Contenu des services techniques silac

1, marquage isotopique des cellules;

3, séparation de SDS - page;

4, séparation de phase liquide et analyse de spectrométrie de masse après clivage enzymatique pancréatique;

Recherche de base de données et analyse quantitative des protéines;

Analyse bioinformatique des protéines différentielles;

7, présentation du rapport expérimental.

Contenu du rapport services expérimentaux

Identification de la protéine et résultats de l'analyse quantitative sil AC;

2 - client signifie DingCarte des pics du spectre de masse correspondant aux protéines;

3, sil AC expérimental étapes expérimentales complètes, l'utilisation de l'instrument, le logiciel pour récupérer les paramètres, etc.

Avantages du Service technique

1, haute sensibilité, faible limite de détection, peut détecter la protéine de faible abondance;

2, forte capacité de séparation et large gamme d'analyse, iitraq peut effectuer l'identification de séparation de tout type de protéine, y compris les protéines de haut poids moléculaire, les protéines acides et basiques, les protéines membranaires et les protéines insolubles;

3, haut débit: 8 échantillons sont analysés en même temps, ce qui améliore le flux expérimental, peut être analysé sur plusieurs points de temps ou différentes protéines traitées en même temps;

Résultats fiables: les résultats des analyses qualitatives et quantitatives sont plus fiables;

5, degré élevé d'automatisation: la phase liquide et la spectrométrie de masse sont utilisées conjointement, l'opération automatique, la vitesse d'analyse est rapide et l'effet de séparation est bon.

Service expérimental: