Expériences de détection MMP (2 / 9) par spectroscopie gélatinase

Expériences de détection MMP (2 / 9) par spectroscopie gélatinase

La méthode de détection de protéase basée sur l'électrophorèse SDS - page et la coloration en gel inverse (zymography) détecte l'activité MMP - 2, MMP - 9 avec une sensibilité allant jusqu'à 10 pg, supérieure à la méthode ELISA.

Le principe de base et la procédure sont les suivants: séparation de l'échantillon contenant la protéase dans un gel SDS - page additionné d'un substrat de collagénase, retrait du gel après la fin de l'électrophorèse incubation avec la réaction enzymatique bufer, coloration du gel et décoloration. Le gel est profondément teint en raison de la protéine de substrat, formant un fond sombre, mais à l'endroit où il y a une bande de protéase, la protéase dégradera la protéine de substrat dans le gel, de sorte qu'elle ne sera pas colorée pour former une zone de brillance, peut indiquer simultanément la position de MMP - 2, MMP - 9 (profil enzymatique), peut détecter des échantillons de sang, d'exsudat, d'extrait cellulaire, etc.

Période de service: 10 jours ouvrables

Fourniture des résultats: rapports de résultats, images représentatives, processus opérationnels et informations pertinentes sur les réactifs.

Expériences de détection MMP (2 / 9) par spectroscopie gélatinaseFourniture d'échantillons à savoir:

1) Le client informe le Groupe expérimental, le numéro et les informations de conception de fond, les exigences spécifiques s'il vous plaît indiquer à l'avance;

2) Collecte, conservation et transport des spécimens:

① échantillon de tissu: tissu frais mis dans l'azote liquide ou - 70 degrés de conservation, tissu pas moins de 100mg;

② culture des cellules: pas moins de 2x106 cellules sont prises dans un tube EP par comptage cellulaire, ajouter 0,5 ml de solution saline physiologique, mélanger et conserver au réfrigérateur (- 70 ° C, éviter la congélation répétée);

③ Échantillon de cellules sanguines: 0,5 ml de solution saline physiologique est ajouté après la conservation de l'échantillon de sang dans un tube anticoagulant ou la séparation des cellules dans un liquide lymphocytaire isolé, conservé (- 70 ° C peut être conservé pendant une longue période, éviter la congélation et la dégel répétées)

④ échantillons de sérum ou de fluide de culture cellulaire: centrifuger pour enlever les impuretés et les retirer dans un tube EP, conserver (49c peut être conservé pendant 15 à 20 jours, - 70 ° C peut être conservé pendant une longue période, éviter la congélation et la dégel répétées)

4) transport des échantillons:

① échantillons de tissus, échantillons de cellules transportés dans la glace sèche;

② les échantillons de cellules peuvent également être envoyés directement au flacon de culture (le sceau garantit qu'il n'y a pas de contamination, que le liquide de culture ne fuit pas);

③ le sérum ou le surnageant est envoyé directement avec un sac de glace (distance de livraison près de 2 3 jours pour arriver).

Note aux clients:

Système de détection avec référence positive ou Ginseng interne, citation avec extraction protéique

Note expérimentale:

1. Lors de la préparation du polyacrylamide, vous devez prendre soin d'exclure les bulles d'air.

L'activité du spectre de gélatinase est influencée par des facteurs tels que les ions calcium, les ions zinc et le pH, de sorte que la formulation du tampon doit être strictement précise, essayez d'utiliser de l'eau Ultrapure, la température d'incubation est également bien maîtrisée.

3. Avec un grand peigne

Le pH du liquide d'incubation à 7,5 - 7,6, la réplication de Triton plus longtemps aura flocs, donc essayez d'utiliser une configuration fraîche lors de l'expérience.

5. Incuber 37 degrés ne pas dans l'incubateur de CO2, car il changera le pH du liquide d'incubation, dans un incubateur normal est correct.

6. La gélatine doit être conservée à 4 degrés et utilisée dans 1 semaine après avoir été assortie

Service expérimental: