Itraq TMT (quantification des marqueurs isotopiques)

Quantification du marquage isotopique:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags) La Technique quantitative de marquage in vitro des Polypeptides, développée respectivement par AB sciex et thermo, utilise plusieurs réactifs isotopiques pour marquer l'extrémité n - terminale d'un polypeptide protéique ou un groupe de chaîne latérale lysine, et des réactifs de poids moléculaire différent pour marquer des échantillons d'origines différentes, permettant ainsi la comparaison de différents groupes de protéines interspécifiques.

Étapes expérimentales itraq:

1. Préparation de l'échantillon: l'échantillon à tester est quantifié pour calculer la concentration en protéines de l'échantillon;

Alkylation protéino - réductrice et enzymolyse: chaque groupe d'échantillons prend 100 μg pour être traité conformément aux exigences du kit itraq, après l'enzymolyse à l'aide d'une solution de trypsine de qualité séquentielle, le segment peptidique enzymolytique est collecté par centrifugation à l'ultratube;

3. Marquage itraq: équilibrez le réactif itraq à la température ambiante, dissolvez - le avec 150 μl d'Isopropanol, prenez le segment peptidique enzymolytique pour ajouter le réactif itraq à la température ambiante après la réaction de 2 h, ajoutez de l'eau pour terminer la réaction, mélangez les différents groupes d'échantillons en quantités égales, lyophilisez Les échantillons sous vide:.

Analyse LC - MS - MS: identification par spectrométrie de masse en tandem avec Q - active orbitrap de thermo.

5. Traitement des données et analyse des données

Présentation des résultats:

ToutBureauAnalyse des thermogrammes de Clustering

* analyse statistique du nombre de protéines de 0

Cycles expérimentaux et normes de livraison

1. Cycle expérimental: 4 - 6 semaines

Normes de livraison: résultats de quantification des protéines, résultats d'identification, données brutes de spectrométrie de masse, résultats d'analyse généalogique (analyse G0). Analyse kegg, etc.)

Informations à confirmer

1. Genre de l'échantillon

2. Type d'échantillon (tissu ou cellules ou sang)

3. Nombre et regroupement des échantillons

4. Exigences analytiques

Références

[1] XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. Analyse protéomique basée sur ITRAQ des lésions pulmonaires aiguës induites par l'acide oléique dans

Souris[J]. Physiologie cellulaire et biochimie, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL, et al. Analyse protéomique quatitative sans étiquette des protéines membranaires exprimées différentiellement

des macrophages alvéolaires pulmonaires infectés par le syndrome reproductif et respiratoire porcin hautement pathogène

Le virus et sa souche atténuée [J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

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