Services techniques de synthèse et de modification de Polypeptides

Introduction technique expérimentale: la synthèse polypeptidique est une séquence de synthèse en phase solide généralement synthétisée de l'extrémité C (extrémité carboxylique) à l'extrémité n (extrémité aminée). La synthèse de Polypeptides dans le passé était une méthode appelée synthèse en phase liquide, réalisée en solution. Depuis que Merrifield a développé avec succès la méthode de synthèse polypeptidique en phase solide en 1963, grâce à des améliorations et des améliorations constantes *, la méthode en phase solide est devenue une technique courante dans la synthèse des Polypeptides et des protéines, démontrant les avantages de la méthode classique de synthèse en phase liquide *, ce qui réduit considérablement la difficulté de purifier le produit à chaque étape. La synthèse polypeptidique est globalement divisée en deux: la synthèse polypeptidique en phase solide et la synthèse polypeptidique en phase liquide.

Principes de la technique expérimentale:

Le synthétiseur de polypeptide dans la phase solide devient le principe de réaction, dans un réacteur en verre étanche et antidéflagrant, de sorte que les acides aminés sont continuellement ajoutés, réactifs, synthétisés dans un ordre connu (séquence, généralement de l'extrémité C - carboxy à l'extrémité n - amino), l'opération aboutit au support polypeptidique. La méthode de synthèse en phase solide réduit considérablement la difficulté de purifier les produits à chaque étape. Pour éviter l'apparition de réactions secondaires, les chaînes latérales des acides aminés participant à la réaction sont toutes protégées. L'extrémité carboxylique est libre et doit être activée avant la réaction.

Processus opérationnel expérimental:

Déprotection: les colonnes et les monomères protégés par fmoc doivent être débarrassés du Groupe protecteur du Groupe Amino avec un solvant alcalin (Piperidine).

Activation et réticulation: le Groupe carboxyle de l'acide aminé suivant est activé par un activateur. Le monomère activé Réticule avec la réaction Amino libre pour former le peptide

La clé. Cette étape utilise un grand nombre de réactifs superconcentrés pour mener la réaction à son terme. Cyclisme: Cette réaction en deux étapes est cyclisée à plusieurs reprises jusqu'à ce que la synthèse soit terminée.

3, élution et déprotection: le polypeptide est élué de la colonne et son Groupe protecteur est élué et déprotégé par un agent déprotecteur (TFA).

Types de modification polypeptidique:

1, technologie de marquage d'extrémité C:

Amidation (C - Terminal)

Aldéhydation (Aldehydes), alcoolysation (Alcohols), PNA (P - NITROANILIDE)

AMC、AFC、 Mercaptoéthylamination (cysteamide), Estérification (ester), N - alkylation (n - alkyi Amides), etc.

2, technologie de marquage n - end:

Acetylated (acetylated), palmytolyl, hynic, marqueur de biotine (biotinylated), BR - acétylated (bromoacetylated)

Réactions de chélation (DOTA, DTPA Conjugated), formaldéhydation (formylated), tétradécyle, octadécylation (myristoylated) succinylation, palmitation, acidification des pommes, acidification des graisses, etc. (succinylated)

3, modification de marquage Fluorescent:

Modifications C - terminales: AFC, AMC, DAP (DNP), Lys (Dye), PNA, rh110

N端修饰: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacétamido fluorescéineRhodamine 110 et Rhodamine B Luciférine, EDANS

FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA

4, réaction de cyclisation:

Boucle sur la tête, boucle sur le milieu, boucle spéciale (n - > C or head to tail)

2 paires de liaisons Disulfide, 3 paires de liaisons disulfide (S - S bond formation).Triulide formation) Peptides actifs de produits naturels cycliques

5, modification de méthylation:

Méthylation des chaînes latérales Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N Méthylation terminale (n - me ARG, N - me ASP, N - me Glu, N - me Leu, N - me nle, N - me NVA, N - me phe, N - me s N -

Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

6, plusieurs modifications spéciales:

Divers couplages (BSA, KL H Conjugated Peptides for antibody production), Phosphorylation (Phosphoserine, phosphotheronine, phosphotyrosine), Sulfonation (Sulfated tyrosine or serine), maps (multipleantigenic Peptides), glycopeptides (glycopeptides), modification PEG (pegylation)

Note expérimentale:

Le client offre:

Séquence polypeptidique, quantité, pureté et exigences spéciales

2, le polypeptide lyophilisé peut être conservé à - 20 degrés ou à température ambiante

3, solution Peptide est beaucoup plus instable que la forme lyophilisée, la solution doit être neutre pH (5 - 7) - 20 degrés de conservation.

4, pour éviter la congélation et la dégel répétées de l'échantillon,HaoStocker en petits échantillons.

Normes de livraison:

Polypeptides, données.

Autres:

Tête de la plupart des PolypeptidesXuanLe solvant est de l'eau de vapotage ultra - pure et l'acide Z dilué ou l'ammoniaque sont également utiles pour la dissolution des Polypeptides alcalins ou acides, respectivement. Si ces méthodes utilisent des Polypeptides qui ne sont pas encore solubles, il est recommandé de les dissoudre avec du DMF, de l'urée, du guanidiniam, du Chloride, de l'acétonitnle.

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