Kit ELISA Interleukine - 5, utilisant la technologie ELISA Double anti - sandwich, la quantification précise du sérum et d'autres échantillons d'interleukine - 5, facile à utiliser, aide à la recherche scientifique sur l'immunité, l'inflammation et d'autres.
Interleukine - 5 ELISA Kit
Interleukine - 5 ELISA KitIl s'agit d'un outil clé utilisé dans la recherche scientifique pour détecter quantitativement la teneur en Interleukine - 5 dans les échantillons biologiques, fournissant un soutien puissant pour approfondir la réponse immunitaire, les mécanismes inflammatoires, etc.
Principe de détection: appliquer le test d'immunoadsorption couplé à une enzyme sandwich à double anticorps. Les ligatures enzymatiques du kit ont été pré - encapsulées avec des anticorps spécifiques dirigés contre l'il - 5. Lorsque l'échantillon est ajouté, l'il - 5 de l'échantillon se lie spécifiquement à l'anticorps en phase solide. L'anticorps anti - il - 5 marqué à l'enzyme est ensuite ajouté pour former le complexe "Solid Phase Antibody - il - 5 - enzyme label antibody". Les non - conjugués sont éliminés par lavage, une solution de substrat (p. ex. TMB) est ajoutée et, catalysée par l'enzyme, le substrat subit une réaction chromogène avec une nuance de couleur directement proportionnelle à la teneur en il - 5 de l'échantillon. L'Absorbance a été mesurée à une longueur d'onde de 450 nm au moyen d'un étalon enzymatique, en contraste avec la courbe standard, ce qui a permis de calculer la concentration d'il - 5 dans l'échantillon.
Composition du kit
Plaque de liaison enzymatique: il y a 96 puits ou 48 puits, pré - encapsulés par un anticorps anti - il - 5, vecteur de la réaction.
Produits standard: généralement lyophilisé, généralement 2 bouteilles. Il est nécessaire de le remettre en solution avec une dilution standard avant utilisation et de le diluer dans différents gradients de concentration, tels que 0, 7,8, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500 pg / ML, etc., pour tracer la courbe standard.
Échantillon Xi libération: pour diluer l'échantillon à mesurer avec une concentration trop élevée, en veillant à ce que la concentration de l'échantillon soit dans la plage de détection du kit.
Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - il - 5 marqué HRP, concentré, dilué au besoin avec une dilution d'anticorps marqueur enzymatique.
Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.
Solution de substrat: Comme pour les substrats TMB, la réaction avec HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme produit un changement de couleur.
Liquide de lavage: plus concentré, l'utilisation doit être diluée proportionnellement avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisée pour laver la plaque de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.
Liquide de terminaison: généralement une solution acide forte (comme l'acide sulfurique), utilisée pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, de sorte que la couleur du liquide réactionnel est stable et facile à lire.
Film de scellement: couvrir la plaque de liaison enzymatique lors de l'incubation pour empêcher l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.
Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.
Exigences relatives aux échantillons
Le sérum: après le prélèvement du sang, laisser à température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant une nuit, centrifuger à 1000 × g pendant 20 minutes, retirer et réserver. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.
plasma sanguin: des anticoagulants tels que l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), l'héparine sont disponibles. Les échantillons sont prélevés par centrifugation à 1000 x G pendant 15 minutes à 2 - 8°c dans les 30 minutes suivant leur prélèvement.
Culture cellulaire supérieure: le surnageant de culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et après élimination des débris cellulaires et des impuretés, le surnageant est prélevé pour détection.
Homogénat de tissus: le sang résiduel est éliminé en rinçant les tissus avec un tampon phosphate pré - refroidi (PBS, 0,01 M, pH = 7,4). Après avoir coupé le tissu, ajouter le PBS en appuyant sur 1: 9 (P / v) pour bien broyer sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.
Si l'échantillon est détecté à court terme, il peut être conservé à 4 ° C; Pour une longue conservation, il faut mettre à - 20 ° C ou - 80 ° C de stockage de congélation, et pour éviter la congélation répétée et la dégel, les échantillons d'hémolyse ne sont généralement pas appropriés pour le test.
Processus opérationnels
Préparation au travail: retirer le kit du réfrigérateur et l'équilibrer à température ambiante 30 minutes à l'avance. Dans le même temps, le liquide de lavage concentré est dilué avec de l'eau distillée ou désionisée dans les proportions requises.
Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Les puits vides sont ajoutés à l'échantillon XI - release, les puits standard sont ajoutés à différentes concentrations de standard, les puits d'échantillon sont ajoutés à l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.
laver: après la fin de l'incubation, défaussez le liquide à l'intérieur des pores, remplissez chaque Pore avec du liquide de lavage, laissez sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répétez le lavage 5 fois, assurez - vous que le fond de lavage des substances non liées.
Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.
Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.
Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à juger selon le rendu de la couleur réelle).
Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.
Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.
Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.
