Récepteur de l'interleukine - 6 (soluble) ELISA Kit, en utilisant la méthode ELISA Double anti - sandwich, la quantification précise du sérum et d'autres échantillons de récepteurs solubles, facile à utiliser, largement utilisé dans la recherche scientifique.
Récepteur de l'interleukine - 6 (soluble) ELISA Kit
Récepteur de l'interleukine - 6 (soluble) ELISA KitConçu pour la détection quantitative du contenu soluble du récepteur Interleukine - 6 dans les échantillons biologiques, il est important pour la recherche sur l'immunité et l'inflammation dans le domaine de la recherche scientifique.
Principe de détection: basé sur le test d'immuno - adsorption couplé à une enzyme sandwich à double anticorps. Les Ligands enzymatiques sont préalablement encapsulés avec des anticorps spécifiques dirigés contre le récepteur soluble de l'interleukine - 6. Après l'addition de l'échantillon, les récepteurs solubles de l'interleukine - 6 se lient aux anticorps en phase solide. Des anticorps anti - récepteur de l'interleukine 6 soluble marqués par l'enzyme sont ensuite ajoutés pour former le complexe "Solid Phase Antibody - soluble Interleukine 6 Receptor - enzyme label antibody". Le non conjugué est éliminé par lavage, une solution de substrat (comme le TMB) est ajoutée et le substrat devient coloré sous catalyse enzymatique, la nuance de couleur étant directement proportionnelle à la teneur en ce récepteur de l'échantillon. L'Absorbance a été mesurée à une longueur d'onde de 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique et la concentration de récepteurs solubles de l'interleukine - 6 dans l'échantillon a été obtenue par comparaison avec la courbe standard.
Composition du kit
Plaque de liaison enzymatique: il y a des spécifications de 96 ou 48 puits, pré - emballés avec des anticorps, qui sont des porteurs de réaction.
Produits standard: généralement lyophilisé, doit être redissous avec une dilution standard et dilué dans une série de gradients de concentration tels que 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML pour tracer la courbe standard.
Échantillon Xi libération: pour diluer l'échantillon à mesurer avec une concentration trop élevée, afin que la concentration de l'échantillon soit adaptée à la plage de détection du kit.
Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - récepteur de l'interleukine - 6 soluble marqué HRP, concentré, à diluer au besoin avec une dilution d'anticorps marqueur enzymatique.
Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.
Solution de substrat: Comme pour les substrats TMB, la réaction avec HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme produit un changement de couleur.
Liquide de lavage: généralement concentré, dilué proportionnellement avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisé pour laver la plaque de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.
Liquide de terminaison: solution acide plus forte (comme l'acide sulfurique) pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, stabiliser la couleur du liquide de réaction pour la lecture.
Film de scellement: couvrir la plaque de liaison enzymatique lors de l'incubation pour empêcher l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.
Mode d'emploi: détails sur les méthodes d'utilisation, les considérations, les indicateurs de performance, etc.
Exigences relatives aux échantillons
sérum: après la collecte du sang, la température ambiante est laissée pendant 2 heures ou 4 ℃ pendant la nuit, 1000 × G centrifuger pendant 20 minutes pour obtenir le nettoyage, la collecte de sang doit être effectuée avec un équipement jetable sans pyrogène et sans endotoxines.
Plasma sanguin: l'EDTA, l'héparine et d'autres anticoagulants sont disponibles, dans les 30 minutes suivant la collecte de l'échantillon, centrifuger à 1000 × G à 2 - 8 ° C pendant 15 minutes pour obtenir le Clearing.
Culture cellulaire supérieure: 1000 × G centrifuger pendant 20 minutes, après élimination des débris cellulaires et des impuretés est prélevé pour détection.
Homogénat de tissus: les tissus sont rincés avec du PBS pré - refroidi (0,01 M, pH = 7,4), le sang résiduel est éliminé, le tissu est cisaillé après avoir été pressé 1: 9 (P / v) plus PBS, bien broyé sur la glace, centrifugé à 5000 × g pendant 5 - 10 minutes pour enlever le nettoyage.
Si l'échantillon est détecté à court terme après le prélèvement, il peut être conservé à 4 ℃; La conservation à long terme nécessite - 20 ℃ ou - 80 ℃ stockage de congélation, et d'éviter la congélation répétée et la dégel, les échantillons hémolytiques ne sont généralement pas appropriés pour le test.
Processus opérationnels
Préparation au travail: retirer le kit du réfrigérateur, équilibrer à température ambiante (environ 30 minutes), diluer le liquide de lavage concentré.
Additions: Faites des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Puits blancs plus échantillon XI - release, puits standard plus différentes concentrations de standard, puits d'échantillon plus échantillon traité, quantité d'échantillon supplémentaire par puits généralement 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.
laver: vider le liquide à l'intérieur des pores, remplir chaque Pore avec le liquide de lavage, laisser sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répéter le lavage 5 fois, assurez - vous de laver les substances non liées.
Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl de réactif d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits, incuber à 37°c pendant 60 minutes.
Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.
Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ à l'abri du rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à en juger par le rendu de la couleur réel).
Mettre fin à la réaction: ajouter 50 µl de solution de terminaison par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.
Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits a été mesurée à la longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique dans les 15 minutes suivant l'addition du liquide de terminaison.
Résultat du calcul: la courbe standard est tracée en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. Selon la valeur od de l'échantillon de la courbe standard pour trouver la concentration correspondante, si l'échantillon est dilué, vous devez multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.
Indicateurs de performance
Gamme de détection: généralement avec un intervalle de 15,6 à 1000 pg / ML, il répond à de nombreux besoins de détection d'échantillons.
sensibilité: peut être aussi bas que 7,8 pg / ML ou même moins, peut détecter des traces de récepteurs solubles Interleukine - 6.
Spécificité: très spécifique de ce récepteur, avec peu de réactions croisées avec d'autres récepteurs de Cytokines, etc.
Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque est généralement inférieur à 10%, le coefficient de variation inter - plaque est inférieur à 15%, garantissant des résultats de détection stables et fiables.
