ELISA Kit récepteur de l'interleukine - 6

ELISA Kit récepteur de l'interleukine - 6

ELISA Kit récepteur de l'interleukine - 6Est un outil utilisé dans la recherche scientifique pour la détection quantitative du contenu des récepteurs Interleukine - 6 dans les échantillons biologiques. L'il - 6r joue un rôle clé dans l'immunomodulation et le processus de réponse inflammatoire, et la détection de son contenu est importante pour les études pertinentes.

1. Principe de détection: le kit Multi utilise le test d'immunoadsorption couplé à une enzyme sandwich à double anticorps. Un anticorps spécifique dirigé contre l'il - 6r a été pré - encapsulé sur une plaque enzymatique. Après l'ajout de l'échantillon, l'il - 6r de l'échantillon se lie spécifiquement à l'anticorps en phase solide. On ajoute ensuite un anticorps anti - il - 6r marqué à l'enzyme qui forme avec l'il - 6r déjà lié à l'anticorps en phase solide un complexe "Solid Phase Antibody - il - 6r - enzyme label antibody". Après un lavage suffisant pour éliminer les substances non liées, une solution de substrat (par exemple, TMB) est ajoutée et, catalysée par l'enzyme, le substrat subit une réaction chromogène avec une nuance de couleur directement proportionnelle à la teneur en il - 6r de l'échantillon. La concentration d'il - 6r dans l'échantillon a été calculée par comparaison avec la courbe standard en mesurant l'Absorbance à une longueur d'onde spécifique (généralement 450 nm) au moyen d'un étalon enzymatique.

2. Composition du kit

• Plaque de liaison enzymatique: 96 puits ou 48 puits, qui ont été pré - encapsulés avec un anticorps anti - il - 6r, sont les vecteurs sur lesquels la réaction a eu lieu.

• Produits standard: généralement lyophilisé, il y a 2 bouteilles. Il est nécessaire de remettre en solution le diluant standard avant utilisation et de le diluer dans différents gradients de concentration tels que 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML, etc. pour tracer la courbe standard.

• Échantillon Xi libération: pour diluer l'échantillon à mesurer avec une concentration trop élevée, assurez - vous que la concentration de l'échantillon est dans la plage de détection du kit.

• Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - il - 6r marqué HRP, concentré, dilué au besoin avec une dilution d'anticorps marqueur enzymatique.

• Libération d'anticorps marqueur enzymatique XI: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.

• Solution de substrat: Comme les substrats TMB, ils peuvent réagir avec le HRP dans l'anticorps marqueur de l'enzyme pour produire un changement de couleur.

• Liquide de lavage: généralement concentré, l'utilisation doit être diluée proportionnellement avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisée pour laver les plaques de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.

• Liquide de terminaison: solution acide plus forte (comme l'acide sulfurique) pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, de sorte que la couleur du liquide réactionnel est stable et facile à lire.

• Film de scellement: utilisé pour couvrir la plaque de liaison enzymatique pendant l'incubation, empêchant l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.

• Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.

3. Exigences relatives aux échantillons

• sérum: après prélèvement du sang, on laisse 2 heures ou 4°C une nuit à température ambiante, puis on centrifuge à 1000 x G pendant 20 minutes, on prélève et on laisse reposer. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.

• Plasma sanguin: l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), l'héparine, etc. sont disponibles comme anticoagulants. Les échantillons sont prélevés par centrifugation à 1000 x G pendant 15 minutes à 2 - 8°c dans les 30 minutes suivant leur prélèvement.

• Culture cellulaire supérieure: le surnageant de culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et après élimination des débris cellulaires et des impuretés, le surnageant est prélevé pour la détection.

• Homogénat de tissus: le sang résiduel est éliminé en rinçant les tissus avec un tampon phosphate pré - refroidi (PBS, 0,01 M, pH = 7,4). Après le broyage du tissu, le PBS est ajouté dans un rapport d'environ 1: 9 (P / v), bien broyé sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.

• Si l'échantillon est détecté à court terme, il peut être conservé à 4 ° C; Pour une conservation prolongée, il est nécessaire de le placer à - 20 ° C ou - 80 ° C et d'éviter la congélation et la dégel répétés, les échantillons d'hémolyse ne sont généralement pas appropriés pour le test.

4. Processus opérationnels

• Préparation au travail: retirez le kit du réfrigérateur et laissez - le équilibrer à température ambiante 30 minutes à l'avance. Dans le même temps, le liquide de lavage concentré est dilué avec de l'eau distillée ou désionisée dans les proportions requises.

• Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Les puits vides sont ajoutés à l'échantillon XI - release, les puits standard sont ajoutés à différentes concentrations de standard, les puits d'échantillon sont ajoutés à l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

• laver: après la fin de l'incubation, défaussez le liquide à l'intérieur des pores, remplissez chaque Pore avec du liquide de lavage, laissez sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répétez le lavage 5 fois, assurez - vous que le fond de lavage des substances non liées.

• Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.

• Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.

• Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à juger selon le rendu de la couleur réelle).

• Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.

• Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.

• Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.

5. Indicateurs de performance

• Gamme de détection: les différents kits varient, la plage de détection commune est de 31,2 à 2000 pg / ML et d'autres intervalles, ce qui peut répondre aux besoins de détection de la teneur en il - 6r dans de nombreux échantillons.

• sensibilité: généralement aussi bas que 15,6 pg / ML ou même moins, capable de détecter des traces d'il - 6r dans l'échantillon.

• Spécificité: hautement spécifique de l'il - 6r, avec peu ou pas de réaction croisée avec des substances telles que d'autres récepteurs de Cytokines.

• Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque est généralement inférieur à 10% et le coefficient de variation inter - plaque est inférieur à 15%, ce qui garantit la stabilité et la fiabilité des résultats de détection.

6. Précautions

• Strictement selon les instructions, les réactifs des différents lots de kits ne peuvent pas être mélangés.

• Utilisez une tête d'aspiration jetable lors de l'opération pour éviter la contamination croisée, l'échantillonnage doit être précis.

• Un lavage adéquat est la clé pour garantir des résultats précis, le lavage de la plaque sans fond est susceptible de provoquer des résultats faussement positifs.

• La solution de substrat est sensible à la lumière, elle doit être conservée et utilisée à l'abri de la lumière, et la réaction de rendu des couleurs doit être effectuée à l'abri de la lumière.

• Le liquide de terminaison est corrosif, en travaillant avec soin pour bien protéger et éviter le contact avec la peau et les yeux.

• Il est recommandé que les étalons et les échantillons soient soumis à un test de porosité pour améliorer la précision des résultats. Le kit est destiné uniquement à un usage scientifique et ne peut pas être utilisé pour le diagnostic clinique.