Récepteur de l'interleukine 5 (soluble) ELISA Kit

Récepteur de l'interleukine 5 (soluble) ELISA Kit

Récepteur de l'interleukine 5 (soluble) ELISA KitEst un outil pour la détection quantitative de la teneur en récepteurs solubles Interleukine 5 dans les échantillons biologiques, joue un rôle important dans le domaine de la recherche scientifique et contribue à une compréhension approfondie des processus physiopathologiques tels que la régulation immunitaire, la réponse inflammatoire et d'autres. Ce qui suit vous présente de multiples façons:

1. Principe de détection: en utilisant la technique ELISA (double anticorps Sandwich Enzyme linked immunosorption Assay). Les ligatures enzymatiques du kit ont été préalablement encapsulées avec des anticorps spécifiques dirigés contre le récepteur soluble de l'interleukine 5. Lorsque l'échantillon est ajouté, le récepteur soluble de l'interleukine 5 de l'échantillon se lie spécifiquement à l'anticorps en phase solide. On ajoute ensuite un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 5 soluble marqué enzymatiquement, qui forme avec le récepteur déjà fixé sur l'anticorps en phase solide un complexe "Solid Phase Antibody - soluble Interleukine 5 Receptor - enzyme label antibody". Après un lavage suffisant, les substances non liées sont éliminées, puis une solution de substrat (par exemple, 3,3 ', 5,5' - tétraméthylbenzidine, ou TMB) est ajoutée. Le substrat subit une réaction chromogène catalysée par l'enzyme dans l'anticorps étalon de l'enzyme, la profondeur de la couleur étant directement proportionnelle à la teneur en récepteurs solubles de l'interleukine 5 dans l'échantillon. La mesure de l'Absorbance à une certaine longueur d'onde (généralement 450 nm) à l'aide d'un étalon enzymatique permet de calculer la concentration de ce récepteur dans l'échantillon par rapport à la courbe standard.

2. Composition du kit

• Plaque de liaison enzymatique: il existe une spécification de 96 ou 48 puits, qui ont été pré - encapsulés avec un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 5 soluble, qui est le vecteur de la réaction.

• Produits standard: généralement lyophilisé, généralement équipé de 2 bouteilles. Il est nécessaire de procéder à une remise en solution avec une dilution de l'étalon avant utilisation et de la diluer dans différents gradients de concentration, par exemple 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML, etc., pour tracer les courbes standard.

• Échantillon Xi libération: pour diluer l'échantillon à mesurer avec une concentration trop élevée, en veillant à ce que la concentration de l'échantillon soit dans la plage de détection effective du kit.

• Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 5 soluble marqué HRP (peroxydase de raifort), qui est concentré et doit être dilué avec une dilution d'anticorps étalon enzymatique selon les besoins lors de l'utilisation.

• Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.

• Solution de substrat: Comme les substrats TMB, il peut réagir avec HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme, ce qui entraîne un changement de couleur.

• Liquide de lavage: généralement concentré, l'utilisation doit être diluée dans une certaine proportion avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisée pour laver les plaques de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.

• Liquide de terminaison: solution acide plus forte (comme l'acide sulfurique) pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, de sorte que la couleur du liquide réactionnel est stable et facile à lire.

• Film de scellement: couvrir la plaque de liaison enzymatique pendant l'incubation pour empêcher l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.

• Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.

3. Exigences relatives aux échantillons

• Le sérum: après prélèvement du sang, on laisse 2 heures ou 4°C une nuit à température ambiante, puis on centrifuge à 1000 x G pendant 20 minutes, on prélève et on laisse reposer. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.

• plasma sanguin: l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), l'héparine, etc. sont disponibles comme anticoagulants. Les échantillons sont prélevés par centrifugation à 1000 x G pendant 15 minutes à 2 - 8°c dans les 30 minutes suivant leur prélèvement.

• Culture cellulaire supérieure: le surnageant de culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et après élimination des débris cellulaires et des impuretés, le surnageant est prélevé pour la détection.

• Homogénat de tissus: le sang résiduel est éliminé en rinçant les tissus avec un tampon phosphate pré - refroidi (PBS, 0,01 M, pH = 7,4). Après le broyage du tissu, le PBS est ajouté dans un rapport d'environ 1: 9 (P / v), bien broyé sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.

• Si l'échantillon est détecté à court terme, il peut être conservé à 4 ° C; Pour une longue conservation, il faut mettre à - 20 ° C ou - 80 ° C de stockage de congélation, et pour éviter la congélation répétée et la dégel, les échantillons d'hémolyse ne sont généralement pas appropriés pour le test.

4. Processus opérationnels

• Préparation au travail: retirez le kit du réfrigérateur et laissez - le équilibrer à température ambiante 30 minutes à l'avance. Dans le même temps, le liquide de lavage concentré est dilué avec de l'eau distillée ou désionisée dans les proportions requises.

• Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Les puits vides sont ajoutés à l'échantillon XI - release, les puits standard sont ajoutés à différentes concentrations de standard, les puits d'échantillon sont ajoutés à l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

• laver: après la fin de l'incubation, défaussez le liquide à l'intérieur des pores, remplissez chaque Pore avec du liquide de lavage, laissez sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répétez le lavage 5 fois, assurez - vous que le fond de lavage des substances non liées.

• Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.

• Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.

• Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à juger selon le rendu de la couleur réelle).

• Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.

• Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.

• Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.