Le kit ELISA à l'interleukine - 6 utilise la méthode ELISA à double anti - sandwich, qui quantifie avec précision l'interleukine - 6 dans des échantillons tels que le sérum et d'autres échantillons. Il est facile à utiliser et fournit des données clés pour la recherche scientifique sur l'immunité, l'inflammation et d'autres.
Interleukine - 6 ELISA Kit
Interleukine - 6 ELISA KitEst un outil pour la détection quantitative de la teneur en Interleukine - 6 dans les échantillons biologiques, largement utilisé dans les domaines de la recherche scientifique tels que l'immunologie, la recherche sur l'inflammation et d'autres. Voici une introduction pour vous:
Principe de détection: technologie ELISA sandwich à double anticorps. Les Ligands enzymatiques du kit ont été pré - encapsulés avec des anticorps spécifiques anti - il - 6. Après l'ajout de l'échantillon, l'il - 6 de l'échantillon se lie spécifiquement à l'anticorps en phase solide pour former un complexe antigène - anticorps. On ajoute ensuite un anticorps anti - il - 6 marqué à l'enzyme qui se lie davantage à l'il - 6 déjà fixé sur l'anticorps en phase solide pour former la structure sandwich "Solid Phase Antibody - il - 6 - enzyme label antibody". Après une étape de lavage, les substances non liées sont éliminées et la solution de substrat (par exemple, TMB) est ajoutée à nouveau. Catalysé par l'enzyme, le substrat subit une réaction chromogène, la nuance de couleur étant directement proportionnelle à la teneur en il - 6 de l'échantillon. La mesure de l'Absorbance à une certaine longueur d'onde (généralement 450 nm) à l'aide d'un étalon enzymatique permet de calculer la concentration d'il - 6 dans l'échantillon par rapport à la courbe standard.
Composition du kit
Plaque de liaison enzymatique: disponible en 96 ou 48 puits, pré - encapsulé par un anticorps anti - il - 6, vecteur de la réaction.
Produits standard: généralement lyophilisé, généralement 2 bouteilles. Il est nécessaire de le remettre en solution avec une dilution standard avant utilisation et de le diluer dans différents gradients de concentration, tels que 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML, etc., pour tracer la courbe standard.
Échantillon Xi libération: pour diluer les échantillons à mesurer avec une concentration trop élevée, en veillant à ce que la concentration de l'échantillon soit dans la plage de détection du kit.
Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - il - 6 marqué HRP, qui est concentré et doit être dilué au besoin à l'aide d'une dilution d'anticorps de référence enzymatique.
Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.
Solution de substrat: Comme pour les substrats TMB, la réaction avec le HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme produit un changement de couleur.
Liquide de lavage: plus concentré, l'utilisation doit être diluée proportionnellement avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisée pour laver les plaques de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.
Liquide de terminaison: généralement une solution acide forte (comme l'acide sulfurique), utilisée pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, de sorte que la couleur du liquide réactionnel est stable et facile à lire.
Film de scellement: couvrir la plaque de liaison enzymatique pendant l'incubation pour empêcher l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.
Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.
Exigences relatives aux échantillons
Le sérum: après le prélèvement du sang, laisser à température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant une nuit, centrifuger à 1000 × g pendant 20 minutes, retirer et réserver. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.
plasma sanguin: des anticoagulants tels que l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), l'héparine sont disponibles. Les échantillons sont prélevés par centrifugation à 1000 x G pendant 15 minutes à 2 - 8°c dans les 30 minutes suivant leur prélèvement.
Culture cellulaire supérieure: le surnageant de culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et après élimination des débris cellulaires et des impuretés, le surnageant est prélevé pour détection.
Homogénat de tissus: le sang résiduel est éliminé en rinçant les tissus avec un tampon phosphate pré - refroidi (PBS, 0,01 M, pH = 7,4). Après avoir coupé le tissu, ajouter le PBS en appuyant sur 1: 9 (P / v) pour bien broyer sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.
Si l'échantillon est détecté à court terme, il peut être conservé à 4 ° C; Pour une longue conservation, il faut mettre à - 20 ° C ou - 80 ° C de stockage de congélation, et pour éviter la congélation répétée et la dégel, les échantillons d'hémolyse ne sont généralement pas appropriés pour le test.
Processus opérationnels
Préparation au travail: retirer le kit du réfrigérateur et l'équilibrer à température ambiante 30 minutes à l'avance. Dans le même temps, le liquide de lavage concentré est dilué avec de l'eau distillée ou désionisée dans les proportions requises.
Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Les puits vides sont ajoutés à l'échantillon XI - release, les puits standard sont ajoutés à différentes concentrations de standard, les puits d'échantillon sont ajoutés à l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.
laver: après la fin de l'incubation, défaussez le liquide à l'intérieur des pores, remplissez chaque Pore avec du liquide de lavage, laissez sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répétez le lavage 5 fois, assurez - vous que le fond de lavage des substances non liées.
Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.
Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.
Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à juger selon le rendu de la couleur réelle).
Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.
Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.
Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.
Indicateurs de performance
Gamme de détection: les différents kits varient, la plage de détection commune est de 15,6 à 1000 pg / ML et d'autres intervalles, ce qui peut répondre aux besoins de détection de la teneur en il - 6 dans de nombreux échantillons.
Sensibilité: généralement aussi bas que 7,8 pg / ML ou même moins, capable de détecter des traces d'il - 6 dans l'échantillon.
Spécificité: très spécifique de l'il - 6, avec peu ou pas de réactions croisées avec des substances telles que d'autres Cytokines.
Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque est généralement inférieur à 10% et le coefficient de variation inter - plaque est inférieur à 15%, ce qui garantit la stabilité et la fiabilité des résultats de détection.
