Interleukine - 7 ELISA Kit

Interleukine - 7 ELISA Kit

Interleukine - 7 ELISA KitEst un outil de détection couramment utilisé dans la recherche scientifique pour la détermination quantitative de la teneur en Interleukine - 7 dans les échantillons biologiques. L'interleukine - 7 est une protéine sécrétoire soluble de 25 kDa codée par le gène il - 7, qui appartient à la famille des facteurs hématopoïétiques et joue un rôle clé dans la différenciation, la prolifération et la survie des lymphocytes. Ce kit peut aider à la recherche sur les mécanismes des maladies associées, à la recherche et au développement de médicaments, etc.

1. Composition du kit

• Plaque de liaison enzymatique: 96 puits ou 48 puits qui ont été pré - encapsulés avec un anticorps anti - il - 7 comme vecteur de la réaction.

• Produits standard: généralement lyophilisé, généralement 2 bouteilles. La remise en solution doit être effectuée à l'aide d'une dilution standard avant utilisation et diluée dans différents gradients de concentration, tels que 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML, etc., pour tracer la courbe standard.

• Échantillon Xi libération: pour diluer les échantillons à mesurer dont la concentration est trop élevée, en veillant à ce que leur concentration se situe dans la plage de détection effective du kit.

• Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - il - 7 marqué HRP, concentré, dilué avec une dilution d'anticorps marqueur enzymatique selon les besoins.

• Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.

• Solution de substrat: Comme les substrats TMB, il peut réagir avec HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme, ce qui entraîne un changement de couleur.

• Liquide de lavage: généralement concentré, l'utilisation doit être diluée avec de l'eau distillée ou désionisée dans des proportions spécifiques, pour laver les plaques de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire efficacement les interférences de fond.

• Liquide de terminaison: solution acide plus forte (comme l'acide sulfurique) pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, ce qui rend la couleur du liquide de réaction stable et facilite la lecture ultérieure.

• Film de scellement: utilisé pour couvrir la plaque de liaison enzymatique pendant l'incubation, empêchant l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.

• Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.

2. Exigences relatives aux échantillons

• Le sérum: après prélèvement du sang, laisser à température ambiante pendant 2 heures ou 4°C pendant une nuit, puis centrifuger à 1000 x G pendant 20 minutes, en aspirant soigneusement le surnageant pour le maintenir. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.

• plasma sanguin: l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA), l'héparine, etc. sont disponibles comme anticoagulants. Les échantillons sont prélevés par centrifugation à 1000 x G pendant 15 minutes à 2 - 8°c dans les 30 minutes suivant leur prélèvement.

• Culture cellulaire supérieure: le surnageant de culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et après élimination des débris cellulaires et des impuretés, le surnageant est prélevé pour la détection.

• Homogénat de tissus: les tissus sont rincés avec du tampon phosphate pré - refroidi (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) et le sang résiduel est éliminé du fond du Che. Après le broyage du tissu, le PBS est ajouté dans un rapport d'environ 1: 9 (P / v), bien broyé sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.

• Si l'échantillon est examiné à court terme, il peut être conservé à 4 ° C; Pour une conservation prolongée, il est nécessaire de le placer à - 20 ° C ou - 80 ° C et d'éviter la congélation et la dégel répétés, les échantillons d'hémolyse ne sont généralement pas appropriés pour le test.

3. Processus opérationnels

• Préparation au travail: retirez le kit du réfrigérateur et laissez - le équilibrer à température ambiante 30 minutes à l'avance. Dans le même temps, le liquide de lavage concentré est dilué avec de l'eau distillée ou désionisée dans les proportions requises.

• Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Les puits vides sont ajoutés à l'échantillon XI - release, les puits standard sont ajoutés à différentes concentrations de standard, les puits d'échantillon sont ajoutés à l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

• laver: après la fin de l'incubation, défaussez le liquide à l'intérieur des pores, remplissez chaque Pore avec du liquide de lavage, laissez sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répétez le lavage 5 fois, assurez - vous que le fond de lavage des substances non liées.

• Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.

• Laver à nouveau: répéter les étapes de lavage ci - dessus.

• Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ éviter le rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à juger selon le rendu de la couleur réelle).

• Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.

• Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.

• Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.

4. Indicateurs de performance

• Gamme de détection: les différents kits varient, la plage de détection commune est de 15,6 à 1000 pg / ML et d'autres intervalles, ce qui peut répondre aux besoins de détection de la teneur en il - 7 dans de nombreux échantillons.

• Sensibilité: généralement aussi bas que 7,8 pg / ML ou même moins, capable de détecter des traces d'il - 7 dans l'échantillon.

• Spécificité: très spécifique de l'il - 7, avec peu de réactions croisées avec d'autres substances telles que d'autres Cytokines.

• Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque est généralement inférieur à 10% et le coefficient de variation inter - plaque est inférieur à 15%, ce qui garantit la stabilité et la fiabilité des résultats de détection.