ELISA Kit, un outil pour la détection quantitative de la teneur en récepteurs de l'interleukine 7 solubles dans les échantillons biologiques, est largement utilisé dans des domaines tels que la recherche immunologique.
Récepteur de l'interleukine 7 (soluble) ELISA Kit
Récepteur de l'interleukine 7 (soluble) ELISA Kit, est un outil pour la détection quantitative de la teneur en récepteurs solubles de l'interleukine 7 dans les échantillons biologiques, largement utilisé dans la recherche immunologique et d'autres domaines.
Principe de détection: méthode ELISA sandwich à double anticorps. Les microplaques du kit ont été pré - encapsulées avec des anticorps spécifiques dirigés contre le récepteur soluble de l'interleukine 7. Lorsque l'échantillon est ajouté, le récepteur soluble de l'interleukine 7 dans l'échantillon se lie à l'anticorps en phase solide. Un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 7 Soluble marqué par l'enzyme est ensuite ajouté, qui forme avec le récepteur déjà fixé sur la phase solide le complexe "Solid Phase Antibody - soluble Interleukine 7 Receptor - enzyme label antibody". Après une étape de lavage pour éliminer les substances non liées, une solution de substrat (par exemple, TMB) est ajoutée et, sous l'action catalytique de l'enzyme, le substrat subit une réaction de rendu des couleurs, avec une nuance de couleur directement proportionnelle à la teneur en récepteurs solubles de l'interleukine 7 dans l'échantillon. La mesure de l'Absorbance à une certaine longueur d'onde (généralement 450 nm) à l'aide d'un étalon enzymatique permet de calculer la concentration de ce récepteur dans l'échantillon par rapport à la courbe standard.
Composition du kit
Plaque de liaison enzymatique: 96 puits ou 48 puits, pré - encapsulés par un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 7 Soluble, vecteur de la réaction.
Produits standard: généralement lyophilisé, il y a 2 bouteilles. Il est nécessaire de remettre en solution et de diluer dans différents gradients de concentration, tels que 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / ML, etc., avant l'utilisation préliminaire pour tracer les courbes standard.
Échantillon Xi libération: pour la dilution d'échantillons à mesurer dont la concentration est trop élevée, garantissant leur concentration dans la plage de détection du kit.
Anticorps marqueur enzymatique: C'est - à - dire un anticorps anti - récepteur de l'interleukine 7 Soluble marqué HRP, concentré, dilué avec une dilution d'anticorps marqueur enzymatique au besoin.
Dilution d'anticorps étalon enzymatique: spécialement conçu pour diluer les anticorps marqueurs enzymatiques.
Solution de substrat: Comme les substrats TMB, la réaction avec HRP dans l'anticorps étalon de l'enzyme peut produire un changement de couleur.
Liquide de lavage: généralement concentré, l'utilisation doit être diluée proportionnellement avec de l'eau distillée ou désionisée, utilisée pour laver la plaque de liaison enzymatique, éliminer les substances non liées et réduire les interférences de fond.
Liquide de terminaison: solution acide plus forte (comme l'acide sulfurique) pour mettre fin à la réaction de rendu des couleurs du substrat, de sorte que la couleur du liquide réactionnel est stable et facile à lire.
Film de scellement: utilisé pour couvrir la plaque de liaison enzymatique pendant l'incubation, empêchant l'évaporation du liquide et la contamination extérieure.
Mode d'emploi: détails sur la méthode d'utilisation du kit, les précautions, les indicateurs de performance, etc.
Exigences relatives aux échantillons
Le sérum: après le prélèvement du sang, laisser à température ambiante pendant 2 heures ou 4 ° C pendant une nuit, centrifuger à 1000 × g pendant 20 minutes, retirer et réserver. Le prélèvement sanguin doit être effectué à l'aide d'un appareil à usage unique sans pyrogène et sans endotoxines.
plasma sanguin: des anticoagulants tels que l'EDTA, l'héparine, etc. sont disponibles. Dans les 30 minutes suivant le prélèvement de l'échantillon, centrifuger à 1000 × G à 2 - 8 ° C pendant 15 minutes, et le nettoyage est prélevé.
Culture cellulaire supérieure: le surnageant de la culture cellulaire est centrifugé à 1000 x G pendant 20 minutes et le surnageant est prélevé après élimination des débris cellulaires et des impuretés.
Homogénat de tissus: rincez les tissus avec du PBS pré - refroidi, retirez le sang résiduel, appuyez sur 1: 9 (P / v) pour ajouter du PBS après avoir coupé les tissus et bien broyer sur la glace. Centrifuger à 5000 × g pendant encore 5 - 10 minutes et prélever le surnageant pour la détection.
Si l'échantillon est détecté à court terme après le prélèvement, il peut être conservé à 4 ℃; Si elle est conservée pendant une longue période, elle doit être conservée à - 20 ℃ ou - 80 ℃, et éviter la congélation et la dégel répétés, les échantillons hémolytiques ne sont généralement pas appropriés pour le test.
Processus opérationnels
Préparation au travail: retirer le kit du réfrigérateur et l'équilibrer à température ambiante (environ 30 minutes). Diluer le liquide de lavage concentré.
Additions: définir des trous vides, des trous standard et des trous d'échantillon. Puits blancs plus échantillon XI - release, puits standard ajouter différentes concentrations de standard, puits d'échantillon ajouter l'échantillon traité, la quantité d'échantillon supplémentaire par puits est généralement de 100 μl, mélanger doucement, incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.
laver: vider le liquide à l'intérieur des pores, remplir chaque Pore avec le liquide de lavage, laisser sécher après 1 - 2 minutes d'immersion, répéter le lavage 5 fois, assurez - vous de laver les substances non liées.
Anticorps marqueurs enzymatiques: ajouter 100 µl d'anticorps étalon enzymatique dilué par puits et incuber à 37°c pendant 60 minutes.
Laver à nouveau: même étape de lavage que ci - dessus.
Rendu des couleurs: ajouter 90 μl de la solution de substrat par puits, mélanger doucement, 37 ℃ à l'abri du rendu de la lumière pendant 15 - 30 minutes (à en juger par le rendu de la couleur réelle).
Mettre fin à la réaction: 50 µl de liquide de terminaison sont ajoutés par puits, la couleur de la solution passe du bleu au jaune.
Lecture: l'Absorbance (do) de chaque puits est mesurée à une longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique pendant 15 minutes après addition du liquide de terminaison.
Résultat du calcul: tracer la courbe standard en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od. La concentration correspondante est déterminée à partir de la courbe standard en fonction de la valeur od de l'échantillon, si l'échantillon est dilué, il faut multiplier par le multiple de dilution correspondant pour obtenir la concentration réelle.
Indicateurs de performance
Gamme de détection: couramment 31,2 - 2000 pg / ML et d'autres intervalles, peut répondre aux besoins de détection de la teneur en récepteurs solubles Interleukine 7 dans une variété d'échantillons.
Sensibilité: peut être aussi bas que 15,6 pg / ML ou même moins, ce qui permet de détecter des traces de ce récepteur dans l'échantillon.
Spécificité: très spécifique du Récepteur soluble de l'interleukine 7, sans réaction croisée significative avec des substances telles que d'autres récepteurs de Cytokines.
Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque est généralement inférieur à 10% et le coefficient de variation inter - plaque est inférieur à 15%, ce qui garantit la stabilité et la fiabilité des résultats de détection.
Précautions
Suivez strictement les instructions, différents lots de réactifs de kit ne peuvent pas être mélangés.
Utilisez une tête d'aspiration jetable pendant l'opération, évitez la contamination croisée, ajoutez l'échantillon pour être précis.
Un lavage adéquat est la clé pour garantir des résultats précis, la plaque de lavage ne se fond pas facilement pour provoquer de faux positifs.
La solution de substrat est sensible à la lumière, elle doit être conservée et utilisée à l'abri de la lumière, et la réaction de rendu des couleurs doit être effectuée à l'abri de la lumière.
Le liquide de terminaison est corrosif, il est utilisé avec soin pour protéger et éviter tout contact avec la peau et les yeux.
Il est recommandé que les normes et les échantillons soient soumis à un test de porosité pour améliorer la précision des résultats. Le kit est destiné uniquement à la recherche scientifique et ne peut pas être utilisé pour le diagnostic clinique.
