Cassette de test de glucose oxydase (God) micromethod

Cassette de test de glucose oxydase (God)
Méthode des traces
Numéro de fret:BC0695
Spécifications:100T/96S

Contenu du produit:
Liquide d'extraction:Liquide 100 ml × 1 flacon, conservé à 4 ° C;
Réactif un:Liquide 15 ml × 1 flacon, conservé à 4 °C;
Réactif II:Liquide 3 mL × 1 flacon, conservé à 4 ° C;
Réactif trois:Liquide 1 mL × 1 branche, - 20 ℃ conservée, peut être conservée par portions après fusion.

Description du produit:
La GD (EC 1.1.3.4), largement présente chez les animaux et les plantes, catalyse l'oxydation du glucose pour produire de l'acide gluconique et produire H 2 O 2, l'une des voies métaboliques de l'oxygène vivant dans les organismes vivants.
La GD catalyse la production de H 2 O 2 par le glucose et l'oxygène produit par la décomposition catalysée de H 2 O 2 par la peroxydase en présence d'oxygène oxyde à son tour l'orthoanilamine en une substance colorée, la nuance de couleur étant linéairement liée à l'activité de la glucose oxydase.

Equipement et instruments propres requis
Spectrophotomètre visible / étalon enzymatique, bain - Marie, centrifugeuse de table, pipette réglable, microcylindre / plaque 96 puits, mortier, glace et eau distillée

étapes de fonctionnement
I. préparation de la détermination des échantillons
1, traitement des tissus: peser environ 0,1 g de tissu, ajouter 1 mL d'extrait pour un homogénat de bain de glace; 8000g 4 ℃ centrifuger pendant 10min, enlever et mettre sur la glace à mesurer.
2, sérum (plasma): détection directe.
II. Étapes de détermination
1, le spectrophotomètre ou l'étalon enzymatique est préchauffé pendant plus de 30 minutes, ajuste la longueur d'onde de 500 nm, l'eau distillée est mise à zéro.
Formulation du liquide de travail God: prendre 15 ml de réactif un plus 3 ml de réactif deux fois, ajuster le pH 5.1 (maintenant disponible).
3, tableau d'addition:
Nom du réactif (μl) tube de dosage
Liquide de travail God 174
Réactif III 6
Mélange, 37 ℃ (mammifères) ou 25 ℃ (autres espèces) bain d'eau 5min
Échantillon 20
Maintenir au chaud le liquide de travail God avec le réactif trois dans un bain - Marie à 37 ° C avant la détermination de l'échantillon, puis ajouter les réactifs ci - dessus au rapport de traces dans l'ordre
Boîte de couleur / 96 puits dans la plaque, ajouter l'échantillon en même temps commencer le chronométrage; L'Absorbance initiale A1 à 20 secondes et l'Absorbance A2 à 1 minute 20 secondes sont enregistrées à la longueur d'onde de 500 nm. Δa = A2 - A1 est calculé.
Iii. Calcul des unités de vitalité God
A. la formule de calcul, déterminée à l'aide d'une cuvette de mesure de quartz à l'état de traces, est la suivante:
1, calcul de la vitalité du God des tissus animaux
(1) calculé par concentration en protéines
Définition de l'unité: 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée produite catalytiquement par mg de protéines tissulaires par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / mg prot) = Δa ÷ (ε × d) × V anti - total ÷ (CPR × V - like) ÷ t = 1333 × Δa ÷ CPR
(2) calculé en poids frais de l'échantillon
Définition de l'unité: la production catalytique de 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée par g de tissu par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / g poids frais) = Δa ÷ (ε × d) × V total inverse ÷ (W ÷ V extrait × V échantillon) ÷ t = 1333 × Δa ÷ W
2, calcul de la vitalité du sérum (plasma) God
Définition des unités: chaque ml de sérum (plasma) produit catalytiquement 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée par minute dans le système réactionnel est défini comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / ML) = Δa ÷ d ÷ ε × V total inverse ÷ t ÷ V échantillon = 1333 × Δa
V total inverse: volume total de la réaction, 0,2 ml; v échantillon: volume d'échantillon ajouté, 0,02 ml; v Extrait: volume de liquide d'extraction ajouté,
1 mL; CPR: concentration protéique de l'échantillon, mg/mL； W: poids frais de l'échantillon, G; d: diamètre de la lumière, 1 cm; ε: coefficient d'extinction de l'orthoanilamine oxydée, 7,5 × 10 - 3 ml / μmol / cm; T: temps de réaction, 1 min.
B. La formule de calcul déterminée avec une plaque de 96 puits est la suivante:
1, calcul de la vitalité du God des tissus animaux
(1) calculé par concentration en protéines
Définition de l'unité: 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée produite catalytiquement par mg de protéines tissulaires par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / mg prot) = Δa ÷ (ε × d) × V anti - total ÷ (CPR × V - like) ÷ t = 2222 × Δa ÷ CPR
(2) calculé en poids frais de l'échantillon
Définition de l'unité: la production catalytique de 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée par g de tissu par minute dans le système réactionnel est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / g poids frais) = Δa ÷ (ε × d) × V total inverse ÷ (W ÷ V extrait × V échantillon) ÷ t = 2222 × Δa ÷ W
2, calcul de la vitalité du sérum (plasma) God
Définition des unités: chaque ml de sérum (plasma) produit catalytiquement 1 µmol d'ortho - Anisidine oxydée par minute dans le système réactionnel est défini comme une unité de viabilité enzymatique.
Gdo (U / ML) = Δa ÷ d ÷ ε × V total inverse ÷ t ÷ V échantillon = 2222 × Δa
V total inverse: volume total de la réaction, 0,2 ml; v échantillon: volume d'échantillon d'addition, 0,02 ml; CPR: concentration protéique de l'échantillon, mg/mL；
W: poids frais de l'échantillon, G; d: diamètre de la lumière, 0,6 cm; ε: coefficient d'extinction de l'orthoanilamine oxydée, 7,5 × 10 - 3 ml / μmol / cm; T: temps de réaction, 1 min.
1, la vitalité de God dans différents tissus d'homogénat n'est pas la même, s'il vous plaît faire 1 - 2 pré - essais avant de faire des essais officiels, si A2 - A1 > 1,
Ensuite, il est indiqué que la viabilité tissulaire est trop élevée et doit être diluée avec le liquide d'extraction dans un surnageant homogénaté de concentration appropriée, de sorte que A2 - A1 < 1,
Pour améliorer la sensibilité de détection.
Si le phénomène A1 > A2 se produit au cours de l'expérience, veuillez diluer l'échantillon avec l'extrait à la concentration appropriée.
Deux personnes font cette expérience en même temps, une personne colorimétrique et une personne chronométrée pour garantir la précision des résultats de l'expérience.
3, ce kit convient uniquement aux tissus animaux et au sérum animal (pulpe).

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